猪瘟疫苗毒与野外毒抗原性之差异猪瘟疫苗毒与野外毒抗....pdfVIP

豬瘟疫苗毒與野外毒抗原性之差異豬瘟疫苗毒與野外毒抗原性之差異 豬瘟疫苗毒與野外毒抗原性之差異豬瘟疫苗毒與野外毒抗原性之差異 潘居祥　鍾明華　黃金城　黃天祥　楊喜金　李淑慧　林士鈺 行政院農業委員會家畜衛生試驗所 摘　　要摘　　要 摘　　要摘　　要 本試驗係從病毒性狀及胺基酸序列差異上，探討豬瘟疫苗毒與野外毒兩者抗原性之差異。從 豬瘟病毒七種不同的限制酶圖譜中選取 36 株野外分離毒，採用新城病毒增強法 (END) 及 E 一干涉 法測定病毒性狀。結果出現 34 株以 END 法呈陽性屬於強毒株，2 株以 E 一干涉法呈陽性屬於弱毒 株。應用病毒斑點性狀測定法 (IIPS) ，依病毒斑灶大小可清楚區別LPC 疫苗毒及 ALD強毒株所產 生之病毒斑灶，但不同野外毒病毒斑灶則出現大小不一的現象。另將 LPC 疫苗毒及 ALD強毒株病 毒核酸中，與中和抗體產生有關的 E0 、E1 及 E2醣蛋白基因 (2,235 bp) 進行核酸定序，並將核 酸序列轉譯成胺基酸序列，共可轉換成 745 個胺基酸。比較兩者胺基酸總體相似性高達 94.7 ﹪， 但在胺基酸序列 471及 480 之間大約在 E2醣蛋白 B domain位置出現高度變異，此區間 10個胺基 酸序列中即出現高達 6個相異的胺基酸序列。 一一 一一 關鍵詞：豬瘟病毒關鍵詞 ：豬瘟病毒、新城病毒增強法、新城病毒增強法、、E 干涉法、間接免疫酵素標幟染色法干涉法 關鍵詞關鍵詞 ：豬瘟病毒：豬瘟病毒、新城病毒增強法、新城病毒增強法 、、 干涉法干涉法 、間接免疫酵素標幟染色法、間接免疫酵素標幟染色法 定序定序 定序定序 緒　　言緒　　言 緒　　言緒　　言 由於豬瘟病毒對各種品系和各階段年齡的豬隻都會感染，很難依毒性不同作毒株的分類，一 般常依豬隻感染豬瘟後，臨床上呈現的各種嚴重程度及病程的長短，將豬瘟病毒的毒力區分成： 強毒株、中間毒株和弱毒株。此三種病毒株與 LPC 疫苗毒之間抗原性差異有多大？現行 LPC 疫苗 種毒已經使用 30 多年，LPC 疫苗毒對於各種豬瘟野外毒變異株能否具有完全保護效力則缺乏文獻 資料。因此有必要探討豬瘟疫苗毒與野外毒兩者間抗原性之差異，並評估目前使用之 LPC 疫苗毒 對於不同豬瘟野外毒之免疫效力，以做為 LPC疫苗改良 及豬瘟 防疫之依 據 。 目前從病毒的分 子生物學上很難區別豬瘟病毒的毒性強弱，有學者以豬瘟病毒在試管內的 培 養特 性 來區別毒株的強弱。 據 Van Oirschot [16]的說 法，豬瘟強毒株的理想培養溫度是 39 ~ 40 C ， 弱毒株 為 33 ~ 34 C ，而中間毒株則 介於強毒株和弱毒株之間為 35 ~ 38 C，強毒株的豬瘟病毒在PK-15 細胞 上的增 殖速度較 其它兩者 來的 快且 力價高，以免疫螢光 抗體染色法區別也發 現強毒株的螢光 較強 且病灶較大 [7] 。此外，強毒株在 56 C 溫度 下的 耐受性也較弱毒株和中間毒株強。 Pirtle 和 35-5-1 Mengeling [12]將分離自慢 性豬瘟病例的病毒和抗強毒株的免疫 血 清進行中和試驗，結果發 現病毒 對自 家血 清的中和反 應效力較不同源血清的反 應 來得高， 這表示強毒株與弱毒株之間的抗原性有 所不同。所以 Van Oirschot [16] 依血 清中和試驗的結果將豬瘟病毒分類為兩種亞群 (subgroup) ， 第 一種亞群是包含了 豬瘟強毒株和已馴化的疫苗毒株，