(植物生理学实验)实验6-1脯氨酸含量的测定.ppt

Designed by XK Wang * 实验6-1 脯氨酸含量的测定 一、目的 二、原理 当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中。加入酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520 nm 波长下比色，用回归方程计算出脯氨酸含量。 三、材料、仪器设备及试剂 1、材料 常温和40℃处理的水稻幼苗。 2、仪器设备 722型分光光度计、大试管、带塞刻度试管、移液管。 3、试剂 2.5%酸性茚三酮溶液、3%磺基水杨酸、冰醋酸、甲苯。 四、实验步骤 1、脯氨酸含量的回归方程： A520 = 0.021X－0.028 ( X：Pro含量 ，μg/2ml ) 2、准确称取不同处理的水稻幼苗（室温和 40℃处理 30 min）叶片各0.5 g，分别置于大试管中。然后，分 别加入3%磺基水杨酸溶液5 mL，在沸水浴中提取10 min（注意：提取过程中需经常摇动），冷却。 3、用移液管吸取2 mL提取液于另一干净的带塞刻度试管中，分别加入2 mL冰醋酸、2 mL酸性茚三酮试剂，在沸水浴中准确加热30 min，溶液即呈红色。 4、冷却至室温后，加入4 mL甲苯，摇荡30s。静置片刻，取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，测定 A520。 A B 3%磺基水杨酸 5 mL 实验流程 冰醋酸 酸性茚三酮 A B 吸取上清2 mL 分别称取0.5 g 冷却 加4ml甲苯 再次煮沸30min A520 水稻幼苗 A、常温处理 B、40℃处理 处理30 min 沸水浴10 min后，冷却。 各吸取2 mL 各吸取2 mL 五、原始数据 W、A520 、VT、VS 六、 结果计算 脯氨酸含量（mg/g）= X × VT W × VS × 103 七、分析讨论 1、测定脯氨酸含量的意义。 2、两次沸水浴处理的作用有何不同？ 八、注意事项 1、提取过程中加甲苯后，混匀，静置，分层。 2、比色杯应干燥、无水滴。 3、比色时，以甲苯为空白对照。 * 实验6-2 植物抗逆性鉴定（电导仪法） 一、目的 二、原理 在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。在高温或低温、干 旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，植物细胞浸提液的电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫程度和植物抗逆性的强弱有关。 比较不同作物或同一作物不同品种在相同胁迫温度下膜透性的增大程度，即可比较作物间或品种间的抗逆性强弱。因此，电导法目前已成为一种鉴定植物抗逆性强弱的标准方法。 三、材料、仪器设备及试剂 （一）材料 常温和40℃处理的 女贞叶片。 （二）仪器设备 电导仪（DDS-12A）、恒温箱、天平、打孔器、小烧杯。 （三）试剂 去离子水。 四、实验步骤 1、分别取室温和40℃处理30 min后的叶片，用吸水纸擦净叶表面（清洁叶片），用打孔器打取小圆片各20片。 2、放入两个干净的小烧杯中，分别准确加入去离子水20 ml，在室温下放置30 min（需不时摇动）。 3、用电导仪测定溶液的电导率。 电导仪（DDS-12A） 见教材 P90 电导率的计算公式： K= G x Q, G 为电导，Q为电极常数。 操作步骤： 1. 温度设定： 25℃。 2.选择最低量程和校正档， 旋转常数旋钮，进行电极常数调节。 3. 选择适宜量程，测定电导率。 注意： 电极不要接触管底部或管壁。 五、原始数据 分别记录室温和处理下的叶片电导率 （单位:Ω-1/cm或S/cm，姆欧/cm或西门子/cm） 六、结果计算 伤害率（%）= 处理电导率 对照电导率 ×100 七、分析与讨论 比较不同处理叶片电导率变化的情况，并加以解释。 八、注意事项 1、叶片表面要擦干净。 2、用去离子水。 3、30min内需不时摇动。 4、测定后，电极要清洗干净。 序号 周次 实验项目名称 1 3 1 植物组织自由水与束缚水含量测定 2-Ⅰ 植物组织水势测定--小液流法 2 5 6 植物根系活力测定（TTC法） 10 环境因子对光合作用的影响 3 7 16-Ⅱ 红外CO2分析法测光合速率 12 叶绿素含量测定 4 9 21 微量测压法测定种子的呼吸速率 22 小篮子法测定植物的呼吸速率 5 15 34 淀粉含量的测定（旋光法） 36 种子活力的快速鉴定（TTC、红墨水法） 6 17 59 植物抗逆性快速测定--脯氨酸含量测定 61 电导法快速测定植物的抗逆性 2012年春