(植物生理学实验)实验三植物光合速率测定.ppt

实验3-1 红外线CO2气体分析仪（CB-1101）法测定植物光合速率 一、实验目的 理解植物光合速度测定的方法 掌握红外线CO2分析仪测定植物光合速率的原理 了解红外线CO2分析仪的操作方法 本实验利用CO2的变化来测定。 二、实验原理 许多由异原子组成的气体分子对红外线都有特异的吸收带。CO2的红外吸收带有四处，其吸收峰分别在2.69μm、2.77μm、4.26μm和14.99μm处，其中只有4.26μm的吸收带不与H2O的吸收带重叠，红外仪内设置仅让4.26μm红外光通过的滤光片，当该波长的红外光经过含有CO2的气体时，能量就因CO2的吸收而降低，降低的多少与CO2的浓度有关，并服从朗伯-比尔定律。分别供给红外仪含与不含CO2的气体，红外仪的检测器便可通过检测红外光能量的变化而输出反映CO2浓度的电讯号。 采用开放式气路系统：该系统用双气室IRGA,以气泵为动力，将流经同化室前的空气（参比气）泵入一个气室，流经同化室后的空气（样本气）泵入另一个气室（分析气室），最后将气体排空，由仪器指示参比气和样本气的CO2浓度差，根据流量、同化室中叶片的面积，求出叶片的光合速率。 泵 流量计 ? ? ? 进气 样品IRGA（C2）　 参比IRGA (C1) 叶室 参比室 排气 植物材料：小白菜或者甘蓝型油菜 仪器：CB-1101红外线CO2气体分析仪 三、材料与主要仪器 CB-1101 CB-1101操作面板及气路图 四、实验步骤 1、仪器组装及调零：，打开电源预热5 min→打开气泵开关→用碱石灰管分别连接面板上的“OUT”和“IN”。利用CO2调零调试仪器。 2、样品测定：将叶片正确放入叶室，并封闭叶室。 打开开路开关→按下初测按钮→待数值稳定后按下测终按钮→待数值稳定后按下完成按钮→记录测定结果【需要记录起始CO2浓度C1、测定完成后CO2浓度C2，叶面温度t，气体流速V】 五、原始记录 V， C1， C2， S ，t V为气体流速，单位 L/min; C1，C2为测定启始和反应完成后的CO2浓度，单位 μL/L；S为光合测定的叶面积，单位为m2，本实验固定为6.5×10-4 m2 ；P为气压，单位 bar；t为同化室叶片表面温度，单位℃。 S 六、结果计算 Pn-净光合速率（单位为μmol·m-2·s-1） 七、分析讨论 1、测定时为何需要从高空采气？ 2、计算的结果为净光合速率，为什么？ 3、本方法是否可以用于测定植物的呼吸速率，如果要测定呼吸速率操作过程中应注意什么？ 4、如果要测定植物的实际光合速率，应如何操作？ 5、结合自已的植物光合速率结果进行分析讨论。 实验3-2 叶绿素含量的测定 一、实验目的 二、实验原理 1、吸光度具有加和性：混和溶液在某一波长下的吸光度为各组分在该波长下吸光度之和。不同组分在某波长下具有不同的吸光系数。 2、叶绿素在红光区具有最大吸收峰，但在不同溶剂下有不同的最大吸收峰波长 在95%乙醇中，叶绿素a和叶绿素b的最大吸收峰的波长分别为665 nm和649nm，两者的浓度可根据以下方程组计算求得： Ca=13.95A665—6.88A649 Cb=24.96A649—7.32A665 三、实验材料与仪器 实验材料：小白菜叶片或油菜叶片 主要仪器：分光光度计 四、实验步骤 称取叶片0.05～0.1g，剪碎或撕碎后放入10mL刻度试管中，加入5～6mL 95%乙醇，置80℃水浴锅中，至组织完全变白，取出冷却。用95%乙醇定容至10mL，摇匀。以95%乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。 五、原始数据记录 A665， A649， W， V 六、结果计算 Ca (mg/L) = 13.95A665 — 6.88A649 Cb (mg/L) = 24.96A649 — 7.32A665 叶绿素总浓度(mg/L) = Ca + Cb 叶绿素的比值 = Ca ÷ Cb 叶绿素的含量 (mg/g) 七、分析讨论 1、结合叶绿素的比值和叶绿素的含量进行分析讨论。 2、叶绿素在蓝光区也有吸收峰，为何不用蓝光波长进行比色测定？