使用QPix400系统自动筛选颜色克隆如红白克隆.pdfVIP

使用QPix400系统自动筛选颜色克隆： 如红白克隆筛选 简介 准备红白克隆平板 通过颜色来筛选重组细菌是一个简单且高 使用常用的E.coli 细菌作为白色克隆，使 优势 效的方法。比如常用的蓝白克隆筛选，通 用表达红色色素的Serratia marcescens D1 • 自动化红白克隆筛选，大大 过B-半乳糖苷酶和X-gal之间的反应，通 （粘质沙雷氏菌D1）作为红色克隆模式 提高筛选效率 过颜色的变化区分克隆是否成功插入外源 微生物。两种微生物在有氧条件下，震荡 • 快速、准确筛选并挑取红白 基因。我们的QPix400系统通过使用 培养24小时。E.coli 使用LB培养基37度培 色克隆 QPix颜色克隆筛选软件模块和红色QPix 养，S.marcescans D1使用TSB培养基25 颜色滤光片成功实现自动化的蓝白克隆筛 度培养。培养24小时后，将两种微生物使 • 通过QPix蓝色滤片增加红白 选，大大增加实验室重组克隆的筛选效 用TSB培养基混合，然后铺到TSA Nunc 克隆之间的颜色对比度 率。通过功能扩展，现在QPix400系统通 Omnitray平板上，25度培养48小时。 过QPix颜色克隆筛选软件模块和新的蓝色 QPix滤光片（Figure1）可以实现红白克 隆的筛选。可以应用于筛选天然红色的微 生物克隆如酒红色酵母以及和X-gal反应 变成红色的克隆。本文描述了如何使用 QPix400系统进行红白克隆的筛选。 Figure 1. 蓝色QPix颜色滤光片，用于增加红色 和白色克隆之间的对比度 对红色和白色克隆成像 在对克隆成像前，蓝色QPix颜色滤片先放 置到QPix系统的成像平台上，然后将 QPix培养板托架、TSA Omnitray平板一 起放置到滤片上。 用于蓝白克隆筛选的QPix颜色克隆筛选模 块也可以用于筛选红白克隆（Figure 2）。通常情况下，这个模块主要用于筛 选蓝白克隆，但是，通过使用蓝色滤片代 替红色滤片，这个软件模块也可以用于筛 选红白克隆（Figure 3A）。蓝色QPix滤 片可以增加E.coli 和S.marcescens D1两 种克隆颜色的反差，提高识别两种颜色克 隆的准确性（Figure 3B）。 Figure 2. QPix420软件主界面。蓝白克隆筛选模块（红圈标记）位于挑克隆程序模块下方 QPix400软件内置的“Auto select”模块 可 以 自 动 区 分 并 识 别 红 色 或 白 色 克 隆 （Figure 4）。“Blue Auto Select”选 项用于识别红色的S. marcescens D1克隆 A B （Figure 5C），“White Auto Select” 选项用于识别白色E.coli克隆（Figure 5D）。通过和彩色相机克隆的图片进行 比较（Figure 5A），可以确认QPix400软 件可以正确识别红色和白色克隆。软件甚 至可以正确识别浅粉色的S. marcescens D1克隆。通过使用蓝色滤片进一步增强 了颜色反差（Figure 5B）。红色或白色 克隆识别完成后，QPix400系统可以准确 快速挑取相应颜色的克隆。 Figure 3. 生长了E.coli克隆（白色）和S.marcescens D1克隆（红色）的TSA OmniTray平板 。（A）没有使用QPix蓝色滤片的 TSA OmniTray平板成像图片， （B）使用了QPix蓝色滤片后平