一些实验问题答案.docVIP

培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？培养菌配好后当天装袋、当天灭菌，如果存放时间长不进行灭菌培养料内的微生物就会在料内发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制好菌的生长。 检查无菌的方法：就是将已经灭完菌的菌棒放到25－28℃的恒温环境中避光培养3天后，拿出来检查看袋内有没有杂菌滋生的痕迹。看菌袋内有没没有导演变色、出现斑点等情况的发生，如果有就证明灭菌不彻底。 在配制培养基的操作过程中应注意哪些问题？为什么？ 一、关于培养基配制 1、当然是注意浓度配比不要搞错 2、很多培养基的加料顺序有讲究，否则会有沉淀产生 3、有些培养基会有不溶物质，分装前应摇匀 4、不要忘了调节pH值（一般细菌都需要，酵母可能自然pH就行，不过不一定） 5、加热溶解时尽量不要煮沸，会损失营养物质 如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方案。 1、取土壤，晾干，过40目筛，用无菌水梯度稀释至0.000001g土/1mL水或0.0000001g土/1mL水，待用 2、配酪素培养基（加琼脂），高压灭菌，倒平板；配LB培养基或发酵培养基，灭菌，分作液体培养基，另外取一些倒斜面。 3、取1的融入土壤的水1mL涂平板，置于恒温箱，于50度或以上培养1～3天，挑选有水解圈（透明圈）的菌落用来划斜面（LB），于50度或以上进行纯化培养。 4、取纯化菌株，于液体LB中扩大培养。 5、离心，取沉淀，盐析，透析，得酶液。 6、以酪蛋白为底物，测酶液酶活，若酶活较大，则该菌株为你要的菌株了。 如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。 纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 将你的样品融于1ml无菌水的离心管中，混匀，吸取0.1ml到另一个装有0.9ml无菌水的离心管中，混匀；在吸取0.1ml到另一个装有0.9ml无菌水的离心管中，混匀。重复以上步骤数次，比如10次（根据你的样品的数量定??。将一系列梯度的菌液均匀的涂在平板上，合适温度培养足够时间再看。越到后面的平板长的菌越少，最终能分离到单独的一个菌落。它是从一个细菌发展出来的，即分离到一个菌。以上操作要求无菌操作，所有器皿都要灭过菌的。 得不到单菌落原因 如果菌落挑取过多的话，也得不到单菌落。你可以每划线一次就烧一次接种针，这样基本可以得到单菌落。