(精编)PCR技术的原理及应用教学课件.pptVIP

PCR技术的原理及应用;;;;生物样品;基因组DNA;DNA聚合酶;引物;94℃变性;94℃;Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus);72℃;;;;;;;;;; 实时荧光定量PCR原理 实时荧光定量PCR的几种方法介绍 实时荧光定量PCR在医学和科研中的应用; 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 ;常 规 PCR技术： 对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析。无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。;实时定量PCR技术：;如何对起始模板定量？;;实时荧光定量PCR 原理 -------- 扩增曲线;实时荧光定量PCR 原理 -------荧光阈值;实时荧光定量PCR 原理 -------Ct值;实时荧光定量PCR 原理 -------Ct值的重现性;实时荧光定量PCR 原理 --------- 定量原理;实时荧光定量PCR 原理 --------- 定量原理;实时荧光定量PCR 原理 --------- 标准曲线;确定未知样品的 C(t)值 通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量;;非特异性荧光标记： 1、 SYBR Green Ⅰ 特异性荧光标记： 2、TaqMan