论析当归六黄汤分煎的临床运用.doc

论析当归六黄汤分煎的临床运用 【摘要】目的对当归六黄汤分煎与合煎样品中阿魏酸的含量进行比较，从而为其临床应用提供依据。方法采用反相液相色谱法，DIKMA ODS-C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，流动相为0.085％磷酸－乙腈，流速1.0 ml·min-1，柱温35℃，检测波长326 nm。结果当归六黄汤分煎样品中阿魏酸含量明显高于合煎样品。结论能为当归六黄汤分煎颗粒的临床应用提供一定的参考。 【关键词】当归六黄汤 阿魏酸 高效液相色谱法当归六黄汤出自李东垣《兰室秘藏》，由当归、生地黄、熟地黄、黄连、黄柏、黄芩、黄芪7味中药组成。用于发热盗汗，面赤心烦，口干唇燥，大便干结，小便黄，舌红苔黄，脉数。主治阴虚火旺证。临床上常用于治疗阴虚火旺所致的盗汗。随着人们生活水平的提高、生活节奏的加快，近年出现了中药配方颗粒。中药配方颗粒是以批量的单味中药饮片为原料，分别加水煎煮、浓缩、干燥而得，经单剂量包装，使用时按处方混合后开水冲服，与中药汤剂的分煎相似。传统中药汤剂是按方配药，加水共煎而得，即合煎。中药配方颗粒汤剂与传统汤剂的化学成分、药效是否有明显的差异，中药配方颗粒是否应广泛应用于临床，还存在争论。本实验以当归中阿魏酸为指标性成分，采用HPLC法比较该方“分煎”和“合煎”制得的汤剂中阿魏酸的含量是否有差异，从中药复方汤剂中有效成分的含量方面为中药配方颗粒应用于临床提供一定理论依据。一、仪器与试药 Aglient1100高效液相色谱仪(包括真空脱气机，自动进样器，四元泵，DAD检测器)，HP1100/ WIND3D化学工作站。阿魏酸对照品购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为纯净水；其它试剂均为分析纯。药材经贵阳中医学院生药实验室董丽莎教授鉴定，当归为伞形科植物当归Angelica sinensia(Oliv.)Diels的干燥根，黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.的干燥根茎，黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.的干燥树皮，黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var. mongholicus (Bge.)Hsiao的干燥根，地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块茎。二、方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为DIKMA ODS-C18(5 μm， 4.6 mm×250 mm)；以0.085％磷酸－乙腈为流动相梯度洗脱，0～31 min乙腈14.5％，31～40 min乙腈60％，40～48 min乙腈14.5％； 流速1.0 ml/min；检测波长326 nm，柱温35℃。2.2 对照品溶液的制备精密称定阿魏酸对照品适量，加70％甲醇制成每毫升含12.48 μg溶液，备用。2.3 供试品溶液制备分别精密称取干燥的当归六黄汤分煎与合煎浸膏粉约1.0 g，置250 ml圆底烧瓶中，加70％甲醇100 ml，称重，加热回流30 min，放冷，补重，过滤，取续滤液过0.45 μm微孔滤膜即得供试品溶液。2.4 阴性样品的制备按照处方比例称取除当归外的各味药材干浸膏粉，混合均匀，称取适量，按照“2.3”项下的方法制备，在“2.1”项的色谱条件下进行测定，在阿魏酸出峰位置阴性对照液无干扰。按照处方称取除当归外的各味药材，加20倍量的水，煎煮至10倍量，浓缩，减压干燥。得干浸膏粉,称取适量，按照“2.3”项的制备方法进行制备，在“2.1”项下的色谱条件下进行测定，在阿魏酸出峰位置阴性对照液无干扰。对照品、样品色谱见图1～3。2.5 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，10 ml于10 ml容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度,摇匀。在上述色谱条件下进样10 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值(A)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为A=5 613.1C-0.818 6,r=0.999 7，阿魏酸在0.012 48～0.124 8 μg范围内线性关系良好。2.6 精密度实验精密吸取阿魏酸对照品溶液10 μl，连续进样6次,在上述色谱条件下测定峰面积，结果RSD＝0.31％，表明精密度良好。 2.7 重复性实验精密称取同一批分煎浸膏粉、合煎浸膏粉各6份，按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件测定，计算阿魏酸的含量，RSD分别为0.0104%、0.8841%。结果表明该方法具有良好的重复性。2.8 稳定性实验精密称取分煎浸膏粉、合煎浸膏粉各1.0 g,按供试品溶液的制备方法处理，分别在0，