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第一章 薄层色谱法（TLC） 涂板方法可以分为涂布法、倾注法、喷洒法及浸渍法四 一 薄层色谱法概述 类，其中涂布法是应用最广泛的涂板方法。 薄层色谱法是一种基于混合物组分在固定相和流动相 TLC固定相薄层涂铺大多采用湿法匀浆，要求薄层均匀、 之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法。与HPLC不同， 平整、无气泡、不易造成凹坑和龟裂。 TLC将固定相涂铺在栽板上，使之形成均匀的薄层。被分离 薄层板活化处理可以获得适宜活性，提高色谱分离效率 的样品溶液点加在薄层板下沿的位置，再把下沿向下放入盛 和选择性。 有流动相（深度约5mm）的密闭缸中，进行色谱展开，实现 （三）点样 混合组分分离。被展开的组分斑点即色谱谱带，通过适当技 点样是TLC分离和精确定量的关键。不同种类的样品常 术对色谱谱带进行处理可得到定性和定量的检测结果。 需选用不同的配样溶剂，一般采用易挥发的非极性或弱极性 薄层色谱法具有技术比较简单，操作容易，分析速度快， 溶剂配样。离子型化合物样品，常需先衍生化成在挥发性强、 高分辨能力，结果直观，不需昂贵仪器设备就可以分离较复 极性小的溶剂中易溶解的样品衍生物。最适合点样的样品浓 杂混合物等特点。 度应为（1～5）μg·μL-1，点样体积视点样技术不同而异。 二 薄层色谱法中的薄层板、薄层板的涂铺、点样和 TLC定量分析时，样品量的适宜范围为最小检出量的几倍至 展开 几十倍。样品原点一般在1mm左右为佳，原点过大或样品量 （一）薄层板 过大，会导致分离变坏。点样步骤一般占TLC全部分析时间 TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表 的三分之一左右，所以使点样仪器化、自动化，既快又准， 面的化学性质。可通过改变涂层材料的化学组成或对材料表 获得好的重复性，是TLC工作者所期盼的。 面进行化学改性来实现改变薄层色谱分离的选择性。此外， （四）展开 固定相的物理性质，如比表面积、比空容、平均孔径等也对 TLC展开就是流动相沿薄层（固定相）运动，以实现样 其色谱行为产生影响。 品混合组分分离的过程。这一过程需在具有一定形状的展开 （1）载体 对TLC载体的基本要求为：机械强度好、化 室中进行。薄层展开有三种形式，直线式展开方式为实际应 学惰性好（对溶剂、显色剂等）、耐一定温度、表面平整、 用中使用最普遍的展开方式。 厚度均匀、价格适宜。 三 薄层色谱流动相与展开机制 （2）固定相 TLC固定相包括改性固定相和未改性固定 （一）对流动相溶剂选择的基本考虑 相两类。硅胶和氧化铝是最常用的两种未改性固定相。 薄层色谱溶剂的选择对分离的影响很大。与HPLC同理， （3）粘合剂 在制备薄层板时，一般需在吸附剂中加入 对复杂样品的分离能否得到理想的结果，流动相的选择是最 适量粘合剂，其目的是使吸附剂颗粒之间相互粘附并使吸附 重要的因素之一，不同溶质与流动相分子、固定相分子间的 剂薄层紧密的附着在载板上。常用的粘合剂可分为无机粘合 作用力不同，因此其移动速度也不同，最终导致样品中各组 剂和有机粘合剂两类。 分的分离。对流动相的选择不仅需考虑极性、选择性等因素， （4）荧光指示剂 荧光指示剂是便于在薄层色谱图上对 更基本的应注意以下因素的影响： 一些基本化合物斑点（无颜色斑点、无特征紫外吸收斑点） (1)溶剂纯度，含有杂质影响分离。 定位的试剂。加入荧光指示剂后，可以使这些化合物斑点在 (2)溶剂吸收环境水分，会使极性等性质改