1-2基因工程原理及操作.pptVIP

第一章 基因工程 北京卷考试说明中的有关要求 基因决定性状 家蚕能够吐出蚕丝为人类利用 神奇的现实： 利用大肠杆菌可以批量生产人的胰岛素； 概念要素： 场所：生物体外 水平：分子水平。 方法：人工“剪切”和“拼接”DNA 特点：定向地改造生物的遗传性状 （可种间育种） 思考：它与生物自然变异的本质区别是什么？ 三、基因工程操作的工具 置疑：用什么生物手段将已互补配对的黏性末端的缝隙连接上？ 2、DNA连接酶 作用：将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切断的磷酯键，形成重组DNA分子 问题：与DNA聚合酶相比，它们的异同？ ——催化的底物不同，都形成磷酸二酯键。 3、基因工程的运载体 置疑：直接将目的基因导入受体细胞会出现什么后果？ 作用：——将外源基因导入宿主细胞的工具 种类： ——质粒、噬菌体、动植物病毒等。 思考：它们为什么能作为运载体？ 1.完成转基因植物的培育，需要哪些基本工具？ ——限制酶、DNA连接酶、运载体（质粒） 2.培育该转基因植物的基本操作程序是什么？ 四、基因工程的基本操作步骤 ㈠获取目的基因 基因组片段克隆在质粒或噬菌体上 方法1：从基因文库中获取目的基因 操作前提： ——对目的基因碱基序列完全不知； 适用范围： ——一般适用于获取原核细胞的基因 操作方法： 问题：基因文库如同国家图书馆，而cDNA文库则像某单位的图书馆，二者除了大小不同之外，还有哪些区别？如果想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，需要构建哪一种基因文库？ 问题：运用PCR技术扩增目的基因，需要什么前提和条件？过程如何？原理是什么？ 方法2：利用PCR技术扩增目的基因 操作前提： ——已知目的基因的一段碱基序列，以便根据这一序列合成引物； 操作条件： ——模板、原料（能量）、引物、TaqDNA聚合酶； 操作方法： ——变性→退火→延伸→第二轮循环。 方法3.化学合成法 人工基因合成法 第二步：形成重组DNA分子 问题1：将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？ 问题2：怎样使目的基因免于被受体细胞的防御系统摧毁呢？ 问题3：怎样将目的基因与质粒进行重组？ 问题4：从cDNA文库中获取的胰岛素基因，导入大肠杆菌细胞中，要实现成功表达，还需要作哪些修饰？ 思考： DNA连接酶的作用在于促使具有相同黏性末端的碱基进行互补配对吗？ ——否。 将连接酶与用同种限制酶切割后的运载体、目的基因混合后，可能有几种类型的重组DNA？ ——运－运，目－目，运－目三种类型。 第三步：将重组DNA分子导入受体细胞 思考： 1.培育转基因动物时，受体细胞能否采用动物体细胞？试说明理由。 2.怎样筛选出含有目的基因的受体细胞？ 第四步：筛选含有目的基因的受体细胞 检测运载体是否已进入受体细胞，常借助载体的什么特性？ 筛选含有目的基因的受体细胞 （1）检测标记基因 （2）DNA分子杂交法(基因探针检测法) ——用放射性同位素标记目的基因,作为检测探针 ——在受体细胞基因组中加入探针，特异性探针会与互补序列结合 ——用放射性自显影检测DNA杂交带 DNA分子杂交检测目的基因的图解 第五步：目的基因的表达 根据中心法则，目的基因怎样表达？成功表达的标志是什么？ 导入大肠杆菌中的基因一定能够成功表达吗? ——否，基因的表达需要适宜的环境 根据什么结果才可以证实目的基因已得到表达？ . 基因工程的基本操作程序 相关考题： （07北京2 ）利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是（ ） A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNAC．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白 基因中内含子 基因多少 基因中启动子 文库大小 基因组文库 cDNA文库 文库类型 小 大 无 有 无 有 部分基因 全部基因 模板（目的基因） DNA聚合酶(Taq酶) 四种脱氧核苷酸 两种DNA引物 PCR技术 聚合酶链式反应 双链DNA 1.变性 升温至90℃ 单链DNA 2.复性 降温至50℃ 引物与母链结合 3.延伸 升温至72℃ DNA聚合酶 解旋 PCR技术与原理 Taq酶有耐高温的特点 酶 引物 解链 模板 体外PCR扩增 体内DNA复制 DNA分子 目的基因 解旋酶 加热至95℃ RNA引物 DNA引物 解旋酶、DNA聚合酶等 TaqDNA聚合酶 蛋白质氨基酸序列 mRNA核苷酸序列 基因核苷酸序列 目的基因 合成 思考：此途径合成的基因与直接分离的基因序列一定相同吗？ 目的基因的核苷酸 序列是已知 化学合