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生物质精炼 木素分析的应用——生物质精炼 Torr, K. M., Love, K. T., Cetinkol, O. P., et al. (2012). Green Chemistry 14(3): 778-787. 31P-NMR 脂肪羟基 G型酚羟基 H型 酚羟基 羧基 386.66－内标胆固醇摩尔质量； I1－胆固醇中羟基的积分面积，此处I1=1； I2－木素结构中羟基的积分面积； W－木素样品质量，mg。 H－羟基含量，mmol/g； 80－内标胆固醇浓度，mg/mL； 50－内标胆固醇用量，?L； 31P-NMR 溶剂：氘代吡啶和氘代氯仿按8-5（体积比） 用上述溶剂准确配制浓度为80 mg/mL的胆固醇（内标）溶液和11 mg/mL的乙酰基丙酮络酸铬（驰豫剂）溶液 分别称取约40.0mg的干燥木素样品，置于容量为1 mL带有刻度容量瓶中 加入0.65mL氘代溶剂，使木素溶解 加入100 uL磷化试剂TMDP 分别加入50 uL内标溶液和100 uL驰豫剂溶液 用氘代溶剂，定容总体积为1mL，摇动使溶液混合均匀 迅速转移到直径为5 mm的NMR测试管中，放入NMR仪器的QNP探头中进行测试。 磷化试剂： 2-氯-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧膦杂戊环（2-chloro-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaphospholane，简称TMDP） 溶剂： Pyridine-d5，Chloroform-d 内标： Cholesterol 驰豫剂： 乙酰基丙酮络酸铬（Chromium(Ⅲ) Acetylacetonate 31P-NMR 1995 2011 2001 13C-NMR 各种有机物都含C原子 不同13C的化学位移变化范围大（0～220×10-6） 化学环境稍有不同的13C核都有不同的化学位移 John Ralph, Department of Forestry, University of Wisconsin, Madison /faculty/ralph/ 乙酰化的木素溶于DMSO-d6、丙酮-d6 13C-NMR 定量分析 化学位移100ppm～160ppm之间积分值为6个苯环上的碳和0.12个乙烯基碳的吸收峰面积的积分值，因此在计算木素中各个结构含量时，以该化学位移区间的积分值为参考标准 Ai-j为每个苯环上化学位移在i～j之间的结构基团的个数 I（i-j）为化学位移在i～j之间的积分面积 I（102-162）为化学位移在102-162ppm之间的积分面积 Capanema, E. A., et al. (2004). J Agric Food Chem 52(7): 1850-1860. Capanema, E. A., et al. (2005). J Agric Food Chem 53(25): 9639-9649. 13C-NMR 木素侧链的各种结构含量 （联接方式） 木素结构中各种功能基含量 苯环上各种结构的含量 木素结构中缩合结构的含量 2D NMR（HQSC） 一维核磁共振波谱往往使一些信号重叠 二维核磁共振技术通过碳核与氢核的耦合 13C NMR 1H NMR 氧化脂肪族侧链C-H共振dC/50.0-95.0ppm dH/2.5-6.0ppm） 2D NMR（HQSC） 芳香环上的C-H共振dC/95.0-160.0ppm dH/5.5-8.5ppm 多糖 脂肪族侧链C-H共振dC/0-50.0ppm dH/0-2.5ppm dC dH Kim, H. and J. Ralph (2010). Org Biomol Chem 8(3): 576-591. 2D NMR（HQSC） Kim, H. and J. Ralph (2010). Org Biomol Chem 8(3): 576-591. 2D NMR（HQSC） Kim, H. and J. Ralph (2010). Org Biomol Chem 8(3): 576-591. 2D NMR（HQSC） Peng, P., et al. (2012). Wood Science and Technology 46(5): 871-885. 木素乙酰化 各称取300 mg木素样品 加入15 mL吡啶-醋酸酐（吡啶：醋酸酐为1:2，体积比）混合液使木素溶解 通入氮气赶走瓶中空气后，迅速盖紧瓶塞 置于暗处，室温下反应72h，其间经常摇荡 木素溶液慢慢滴入搅动着的200 mL乙醚中沉淀出乙酰化木素 用乙醚洗涤沉淀多次直至无吡啶气味 置入40℃的真空干燥箱中干燥 干燥后的乙酰化木素样品保存于放有P2O5的真空干燥器中备用。 激光共聚焦显微镜(CLSM) 木素-碳水化合物复合体