仪器分析课件chapter3高效液相色谱幻灯片.pptVIP

① R+－OH-＋H+Cl- →R+－Cl-十H2O ② R+ － OH-＋M+Cl- →M+OH－＋R+－Cl- 由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离子M+转变成相应的碱，由于OH-离子的淌度为Cl-离子的2．6倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。对于阴离子样品也有相似的作用机理。 在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。后来，Frits等人提出采用抑制柱的离子色谱体系，而采用了电导率极低的溶液，例如1×10-4～5×10-4mol·dm-3苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱。 （六）离子对色谱法（IPC） 离子对色谱法是分离分析强极性有机酸和有机碱的极好方法。它是离子对萃取技术与色谱法相结合的产物。在20世纪7O年代中期，Schill等人首先提出离子对色谱法，后来，这种方法得到十分迅速的发展。 1．离子对色谱法原理 离子对色谱法是将一种（或数种）与溶质离子电荷相反的离子（称对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为的一种色谱法。关于离子对色谱机理，至今仍不十分明确，已提出三种机理：离子对形成机理；离子交换机理；离子相互作用机理。现以离子对形成机理说明之。假如有一离子对色谱体系，固定相为非极性键合相，流动相为水溶液，并在其中加入一种电荷与组分离子A-相反的离子B+，B+离子由于静电引力与带负电的组分离子A-生成离子对化合物A-B+。离子对生成反应式 由于离子对化合物A-B+具有疏水性，因而被非极性固定相（有机相）提取保留。组分离子的性质不同，它与反离子形成离子对的能力大小不同以及形成的离子对疏水性质不同，导致各组分离子在固定相中滞留时间不同，因而出峰先后不同。这就是离子对色谱法分离的基本原理。 2．键合相反相离子对色谱法 离子对色谱法类型很多，根据流动相和固定相的极性可分为反相离子对和正相离于对色谱法。其中以键合相离子对色谱法最重要。这种色谱法的固定相采用非极性的疏水键合相［如十八烷基键合相（ODS）等］，流动相为加有平衡离子（反离子）的极性溶液（如甲醇一水或乙腈一水）。 根据离子对生成反应式，平衡常数 KAB可表示为 根据定义，溶质的分配系数 根据上两式，有 式中β为相比。容量因子k 随KAB和[B+]水相的增大而增大。 键合相反相离子对色谱法操作简便，只要改变流动相的pH值、平衡离子的浓度和种类，就可在较大范围内改变分离的选择性，能较好解决难分离混合物的分离问题。此法发展迅速，应用较广泛. 反相离子对色谱 RP-Ion-Pair HPLC Minutes 0 2 4 6 8 10 12 14 Volts -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 Volts -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 Mg Cd Zn Chromatogram of Mg, Cd and Zn separation （七）尺寸排阻色谱法（SEC） 尺寸排阻色谱法又称凝胶色谱法，主要用于较大分子的分离。与其他液相色谱方法原理不同，它不具有吸附、分配和离子交换作用机理，而是基于试样分子的尺寸和形状不同来实现分离的。 1．分离原理 尺寸排阻色谱是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法。其固定相为化学惰性多孔物质——凝胶，它类似于分子筛，但孔径比分子筛大。凝胶内具有一定大小的孔穴，体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本上按其分子大小，排阻先后由柱中流出。 尺寸排阻色谱被广泛应用于大分子的分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。它具有其他液相色谱所没有的特点： （1）保留时间是分子尺寸的函数，有可能 提供 分子结构的某些信息。 (2) 保留时间短，谱峰窄，易检测，可采用灵敏 度较低的检测器 （3 ) 固定相与分子间作用力极弱，趋于零。由于 柱子不能很强地保留分子，因此柱寿命长。 （4）不能分辨分子大小相近的化合物，相对分子 质量差别必须大于10％才能得以分离 2．固定相 尺寸排阻色谱固定相种类很多，一般可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。所谓凝胶，指含有大量液体（一般是水）的柔软而富于