分子生物学分子生物学研究法下-西安电子科技大学.pdfVIP

西安电子科技大学 夏玉琼 分子生物学 第五章分子生物学研究法（下） ——基因功能研究技术 第三节蛋白质及RNA相互作用技术 第四节基因芯片及数据分析 夏玉琼 11/30/2017 2017/11/30 2 西安电子科技大学 夏玉琼 目录 蛋白质及RNA相互作用技术 酵母单杂交系统 酵母双杂交系统 体外蛋白质相互作用技术 细胞内蛋白质相互作用研究 RNA干涉技术 基因芯片及数据分析 3 西安电子科技大学 夏玉琼 酵母单杂交系统 用途 研究DNA与蛋白质之间的相互作用 特点 可以识别出稳定结合在DNA上的蛋白质 再筛选DNA文库直接获得靶序列相互作用蛋白的 编码基因 另外 也可以分析鉴定细胞中转录调控因子（一种蛋白质） 与顺式作用元件（一种DNA）相互作用 4 西安电子科技大学 夏玉琼 酵母单杂交系统的基本原理 酵母转录激活结构域 转录因子 顺式元件 顺式元件 顺式元件 最基本启动子 报告基因 研究目标 转录因子是否与顺式元件结合 结构 顺式元件在启动子上游，报告基因在启动子下游 过程 转录因子与顺式元件结合，激活最基本启动子，使报告基因表达 接入三个以上的顺式作用元件，可增强转录因子的识别和结合 效率 5 西安电子科技大学 夏玉琼 酵母单杂交系统的应用 确定某个DNA分子与某个蛋白质之间的相 互作用 分离编码结合在顺式作用元件或其他DNA 位点的功能蛋白的编码基因 验证反式作用因子的DNA结合结构域 准确定位参与特定蛋白质结合的核苷酸序 列 6 西安电子科技大学 夏玉琼 利用酵母单杂交体系和已知的顺式作用元件从 拟南芥cDNA文库筛选转录调控因子 1. 选择可能会表达成转 拟南芥cDNA插入片段 录调控因子的未知基因 2. 插入DNA结合结构域 PADH1 GAL4 AD