RNAi基因沉默机制知识讲稿.ppt

RNAi基因沉默机制 RNA干扰(RNA interference，RNAi) RNA干扰是dsRNA介导认的特异性基因表达沉默现象，是生物界一种古老而且进化上高度保守的基因表达调节机制。 1998年首次发现将dsRNA注入线虫可特异性抑制基因表达，并将这种由dsRNA引发的抑制特定基因表达现象称为RNAi。 是由双链RNA（dsRNA）介导的、由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。 其实质是通过双链RNA使目的mRNA降解，从而特异性地抑制目的蛋白表达。 RNA干扰(RNA interference，RNAi) RNA干扰 (RNA interference, RNAi) 是真核生物中的一种普遍现象，它在很多不同的生物过程中起到非常重要的作用。这些过程包括发育调控，抵抗病毒侵染，以及染色质修饰。RNAi的重要特征包括Dicer切割产生小分子RNA和RNA诱导的沉默结合(RNAinduced  silencing  complex,  RISC)的形成。RISC可以导致转录或转录后水平的基因沉默。在植物中存在至少三种RNAi通路，这包括siRNA介导的转录后水平的基因沉默，miRNA介导的切割或翻译抑制和转录水平的基因沉默。转录水平的基因沉默通常与染色质的修饰（DNA和histone的甲基化）紧密相关。 RNAi的定义 目前对RNAi (RNA interference)的定义有很多种，不同的资料对其定义的侧重点也不尽相同，如果将RNAi看作一种生物学现象，可以有以下定义： ① RNAi是由dsRNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。 ② RNAi是有dsRNA参与指导的，以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。具有核苷酸序列特异性的自我防御机制，是一种当外源基因导入或病毒入侵后，细胞中与转基因或入侵病毒RNA同源的基因发生共同基因沉默的现象。 RNAi的定义 如果将其作为一门生物技术，则定义为 ： ① RNAi 是指通过反义RNA与正链RNA 形成双链RNA 特异性地抑制靶基因的现象,它通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA(有义RNA 和反义RNA) ,从而诱导内源靶基因的mRNA 降解,达到阻止基因表达的目的。 ② RNAi是指体外人工合成的或体内的双链RNA（dsRNA）在细胞内特异性的将与之同源的 mRNA降解成21nt～23nt 的小片段，使相应的基因沉默。 ③ RNAi是将与靶基因的mRNA 同源互补的双链RNA(dsRNA ) 导入细胞,能特异性地降解该mRNA ,从而产生相应的功能表型缺失, 属于转录后水平的基因沉默(post - transcriptional gene silence , PTGS)。 牵牛花中dsRNA介导查耳酮基因沉默模式 RNAi应答的基本特征 1 靶基因内源性序列不发生改变。 2 细胞质中靶mRNA水平下降，但细胞核的mRNA前体数量未受影响。 3 每个细胞仅需要少量分子就可对大量mRNA发挥作用，提示存在某些放大 和/或 催化活性在起作用。 4 RNAi效应可以在线虫体内传播。 RNAi相关的基因沉默通路示意 基因沉默的综合模型 RNAi的运用 RNAi主要通过在转录后(post-transcriptional)水平阻断基因的表达，并借此研究基因的功能。同时它为我们提供了一个治疗疾病的新途径。比如，我们可以按拟定的方式来关闭(shutting off)非必需或致病基因的功能。从理论上说，若能关闭致病基因的表达则很多疾病将被治愈。动物实验已证明，可以通过RNAi的方法使导致血胆固醇升高的基因“沉默”；病毒性疾病，眼疾，心血管代谢性疾病等方面的临床试验也正在进行中；这一方法为病毒性肝炎、艾滋病和肿瘤等人类顽疾的治疗指了一条新路。