四川师范大学-生命科学学院-分子生物学-期末复习重点.docx

分子生物学Section C 核酸的性质核酸的结构DNA是反向平行的双螺旋结构，碱基之间存在氢键、碱基堆积力。RNA的结构特点：①分子较小 ②多为单链 ③稳定性差，易水解DNA结构分类：B-DNA A-DNA Z-DNARNA的分类：SnRNA ScRNA asRNA mRNA tRNA rRNA hnRNA核酸的理化特性酸水解，碱变性对酸敏感度：糖苷键 磷脂酸键 嘌呤 嘧啶密度：RNADNA蛋白质核酸的光谱学和热力学特性吸收峰值：DNA/RNA=OD260 蛋白质=OD280纯DNA：OD260/ OD280=1.8；1.8，有RNA污染；1.8，有蛋白质、酶污染Section D 原核与真核生物的染色体结构组蛋白 核心组蛋白真核生物的染色体结构C-G岛：存在于启动子附近管家基因中的长约1-2kb的未被甲基化的富含CG的区域（但哺乳动物中通常被甲基化）。常染色质：指间期核内染色质纤维折叠压缩程度低，处于伸展状态，用碱性染料染色时着色浅的那些染色质。异染色质：在细胞周期中，某些染色体或染色体的某些部分的固缩常较其他的染色质早些或晚些，其染色较深或较浅，具有这种固缩特性的染色体称为异染色质。理想复性动力学曲线解释 P84真核生物：分为3个阶段，高度重复序列、中度重复序列、单一拷贝序列。单一拷贝（50%-60%）：复性速度慢，大多是结构基因。中度.....（25%-40%）：遗传多态性概念基因或基因座上碱基变化使该基因或基因座产生了多种形式，形成了DNA序列的不同形态。分类：单核苷酸多态性（SNP）：在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，是最常见的一种可遗传变异。简单序列重复多态性（SSLP）：微卫星DNA扩增产物长度的多态性。限制性片段长度多态性（RFLP）：由遗传多态性引起的如SNP,导致限制性内切酶的切割位点发生改变，使酶切后产生片段长度发生不同。Section E DNA的复制冈崎片段：DNA复制过程中，由于复制方向只能从5’—3’端，前导链能够进行连续复制，而后随链先通过形成片段，再连接形成一条链，形成的片段就叫冈崎片段。DNA复制时为什么需要RNA引物？因为模板复制最初几个碱基时，碱基堆积力、氢键结合力都很弱，所以碱基错配几率大；少数几个核苷酸没有与模板形成稳定双链结构，所以DNA pol的3’—5’的校对活性很难发挥作用；先合成RNA引物，既可以为DNA pol 提供自由3’-OH 端，又容易被DNA polⅠ识别，停止其聚合作用，便于DNA polⅠ进行切口平移；切口平移过程中发生错误的几率小，因为DNA polⅠ具有3’-5’的外切酶活性校对功能。原核生物（细菌）的DNA复制过程（以大肠杆菌为例，环形DNA） P79起始：DnaA+oriC，形成复合物，识别起始位点DnaB（DNA helicase）水解解旋，同时Ssb覆盖稳定单链结构DNAG(DNA primase)合成RNA引物，提供3’-OH端Ⅱ型拓扑异构酶（DNA gyrase DNA促旋酶）引入负超螺旋，解开正超螺旋延伸：DNA pol Ⅲ（二聚体） 合成引物，并进行延伸 α亚基：聚合作用 ε亚基：3’-5’外切酶活性的校对功能 β亚基：固定，形成clampDNA pol Ⅰ切除RNA引物，并填补DNADNA ligase连接磷酸二酯键终止分离：在oriC的180。对面，存在几个终止子。复制叉与Tus蛋白结合，阻止复制叉移动，再通过拓扑异构酶Ⅳ解链。真核生物的DNA复制过程 P87起始：多个起始位点，但都有一个简单的11bp的保守序列。ARS+ORC,识别起始位点，CDK激活ARS+ORC复合物，引导DNA解旋（50bp/s）进行复制 RP-A功能类似Ssb延伸：DNA pol α：DNA primer活性 + 聚合酶活性 DNA pol δ：前导链上替换α，合成长链，可能在后随链上一样，有校对活性 DNA pol ε：可能在后随链上完成DNA复制，有校对活性 PCNA（复制因子）：功能类似β亚基端粒酶：含义RNA和蛋白质，RNA具有反转录的功能。Section F DNA损伤、修复与重组DNA复制忠实性机理DNA pol：碱基配对原则3’-5’的外切酶活性RNA引物错配修复DNA修复原理： P99光复活（photoreactivation）：正确DNA→紫外光→嘧啶二聚体→黑暗条件→与酶（DNA光解酶）结合→可见光下→修复烷基转移酶：错误的O6-G-T→修复→G-C，烷基被烷基转移酶吸收，每个烷基转移酶只能用一次切除修复：NER（核苷酸切除修复）：UvrA+UvrB识别→UvrB+UvrC,