[医学]第七章+克隆动物.pptVIP

本章内容 克隆(clone) 克隆(clone)是指通过无性繁殖的手段，从一个动物细胞获得遗传背景相同的细胞群或个体群的过程。 广义上的动物克隆就是指动物的无性繁殖(asexual reproduction)，即用无性繁殖的手段，由单一个体产生外形、性能和基因型完全一致的多个动物。狭义上讲，早期动物克隆方法是采用胚胎分割(embryo splitting)，属最简单的人工动物克隆方式。不经过有性生殖过程，而是通过细胞核移植生产遗传结构与细胞核供体相同动物个体的技术，就叫做动物克隆。 1 核移植技术的提出 2 核移植技术的创立 3 胚细胞克隆两栖类动物的产生 4 DNA结构发现 5 植物细胞全能性的验证 6 体细胞克隆两栖类动物的成功 7 被怀疑的单亲小鼠及胚细胞克隆小鼠的出生 8 家畜胚细胞克隆的成功 9 Dolly出生的前奏 10 Dolly风暴 1 核移植技术的提出 Freiberg大学动物学教授设想受精卵分裂后的每个子细胞只继承了母细胞的一半信息。依次来解释受精卵的机体细胞会变成各样的特化状态（1885年）。 然而， 德国胚胎学家Hans Spemann分别将海胆和蜥蜴的2-细胞胚的两个卵裂球分开，分别完成了两个个体。 2 核移植技术的创立 1928年，Hans Spemann在蜥蜴上完成了人类历史上的第一次卵裂球核移植实验。证实了每个胚胎细胞均具有全部遗传信息，并能够最终发育成完整的个体。 3 胚细胞克隆两栖类动物的产生 1952年Robert Briggs和Thomas.J King用核移植方法克隆出了北美豹蛙的蝌蚪。发现随着胚胎发育的前进，其胚细胞用于克隆更加困难，遗传性丢失。因而，用分化的成年动物体细胞克隆动物是不可能的。 4 DNA结构发现 1953年，英国物理学家Francis Crick和美国的Jame Waston共同发现了DNA的结构，从此改变了遗传学研究的方法，创立了分子生物学这门学科。 5 植物细胞全能性的验证 1958年，Cornell大学生物学家F.E.Steward成功地用一个胡萝卜根培养出了完整的植株。Steward 把胡萝卜根细胞一个个分开，然后置于细胞培养基上在试管里培养,但细胞发育成组织后，再移植到土壤中，能够发育成完整的胡萝卜个体。生物界轰动！ 6 体细胞克隆两栖类动物的成功 1962年，牛津大学生物学家John Gurdon宣布用已经分化的南美青蛙蝌蚪的肠细胞核克隆出完整个体，后来又从成年蛙的角质细胞克隆出了蝌蚪。这是第一次体细胞克隆动物成功地报道。 7 被怀疑的单亲小鼠及胚细胞克隆小鼠的出生 8 家畜胚细胞克隆的成功 1984年，丹麦科学家Steen 成功地获得了第一例胚细胞克隆山羊。 突破了两个难题： 一、使用未受精的卵母细胞作为受体。 二、用电刺激融合两种细胞。 9 Dolly出生的前奏 1995年，Roslin研究所Willmut用胚盘细胞克隆出了两只绵羊，表明已经有组织分化的细胞仍具有发育的全能性。 10 Dolly 风暴 1996年，Willmut和Campbell等用上述方面成功地从培养的乳腺细胞得到第一只成年体细胞克隆动物。从而引起了Dolly 风暴！ 第二节 胚胎分割 一、胚胎分割基本原理 镶嵌发育 调整发育 在哺乳动物早期胚胎的发育过程中，细胞分化的调整幅度很大，但随着发育的向前迈进，其调整能力逐渐减弱，细胞的组织发育方向变得愈来愈固定，直至调整能力完全丧失。 二、胚胎分割的方法 (一)卵裂球分离培养法 机械法： 酶法 (二)桑葚胚及其以后阶段胚胎的直接分割法 桑葚胚及其以后阶段的胚胎分割时，可不进行固定而直接分割。由于透明带韧性较强，分割之前可先进行软化处理。 1．显微玻璃针分割法 2．显微刀片分割法 3．胚胎徒手分割法 第三节 克隆动物的操作程序 一、细胞核移植的基本原理 胚胎细胞、胚胎干细胞、胎儿成纤维细胞以及成体细胞的每一个细胞核具有相同的遗传物质。发生早期分化的胚胎细胞核移植到成熟卵母细胞中，可因其特殊因子的作用，使植入核基因表达被重新编排或调整，将“发育钟”拨回到受精状态，即恢复“全能性”。胚胎干细胞具有全能性及调整能力。胎儿成纤维细胞和成体细胞等已分化细胞同样具有潜在的发育全能性，经过去分化培养，可以恢复其全能性。因而，经过核移植后的重组胚胎可以正常发育为具有相同遗传物质的新生个体。 二、显微操作器械 (一)显微操作仪 (二)微吸管 包括固定吸管以及注射吸管等。 三、细