Freeβ-HCG综述.doc

游离β人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒 （化学发光法) 第部分 综述资料 产品预期用途 及其临床诊断我们选题的目的就是研制高质量的血清学指标化学发光定量测定试剂盒，建立一种科学、方便、经济的血清学检测方法，为临床诊断提供重要依据。 的特性 2.1的分子结构10个Cys残基，形成5个链内二硫键(7-31、1O一6O、28—82、32—84、59—87)维持结构稳定。hCG的α-亚基的生物特性和其他垂体糖蛋白激素，如卵泡刺激素（FSH）、黄体生成激素（LH）、促甲状腺激素（TSH）的α-亚基相同。β-亚基的分子量约15000，是145个氨基酸组成，链中含有12个Cys残基，形成6个链内二硫键(93—1 OO、26—110、23—72、9-57、34 88、38—90)，这些二硫键的存在决定了hCG的二级结构，N端连接的寡糖附在13和30位天冬酰胺残基上，121，127，132，138位4个丝氨酸连接(O端连接)寡糖键结合在C端肽上[2]。O-连寡糖主要有两种形式，三糖和六糖。β-亚基为HCG特异性链，可被单克隆抗体检测，是一个较好的标志物。 2.2 Free β-HCG的生物学功能 产品预期用途 本产品的预期用途为和。 二、产品描述 化学发光免疫分析 20世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行分析检测，即利用发光的化学反应（chemiluminescence，CL）和生物反应（bioluminescence，BL）分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。这一方法，从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段，近十年来获得了很大的发展。化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）以其灵敏度高（attomole 即10-18mol），快速（几秒钟内产生化学发光信号，有的情况下信号可持续几小时），简便，测试中不使用有害的试剂，因此成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 我公司采用的化学发光免疫分析方法，是利用酶催化发光底物，则发光底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子，利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。 与几种传统的免疫学检测方法对比而言，无论从灵敏度、检测时间、线性范围、试剂的稳定性、有无环境污染等方面对比，化学发光法的优势都显得极为突出。 化学发光法作为一种20世纪90年代才迅速兴起的一种新型检测技术，除具有检测方法简单快速的优点之外，还具有灵敏度高，检测范围宽等优点，因此越来越多的受到临床诊断实验室的关注，是近年来该领域的研究热点。而我公司经过多年来的深入研究，已经开发建立了化学发光免疫检测平台，这就为下一步各种检测试剂盒的建立打下了坚实的基础。 检测原理 （化学发光法）是基于酶联免疫分析技术和化学发光检测技术建立的检测体系。试剂盒应用双抗体夹心法原理，将单克隆抗体包被微孔反应板作为固相载体，辣根过氧化物酶（HRP）标记克隆抗体作为酶结合物，采用步法反应模式。在微孔板各孔中分别加入标准品、样本后，加入酶结合物，-抗原-抗体-酶复合物。洗去未结合的酶结合物后，加入化学发光底物，其发光强度与Free β-HCG含量成正比。利用标准品所建立的标准曲线，可以计算出样本中的含量。 双抗体夹心法原理如下图所示： 主要原材料来源 本试剂盒涉及到的主要原材料均为外购产品，来源如下： 抗原： DELFIA 时间分辨荧光法甲胎蛋白/游离hCGβ亚基双标试剂盒测定其靶值为13421ng/ml。 β-HCG包被抗体：购自依美诺生物 HRP-抗：购自依美诺生物 主要生产工艺过程 4.1包被板的生产 4.2 酶结合物的配制与分装 4.3 标准品的配制与分装 4.4 发光底物的配制与分装 4.5 试剂盒组装流程图 标准品、质控品的制备方法及量值的溯源 标准品是经标定的在试剂盒中配备的校准物质。标准品内含有一定量的抗原物质，根据不同的抗原含量以及这些抗原在测定中不同的发光值，即可建立校准曲线，用于计算待测样本中该物质的含量。 标准品的制备方法是在选定的标准品稀释液中添加一定量的抗原，用DELFIA /游离hCGβ亚基双标试剂盒测定的临床进行赋值。定值后的标准品采用逐级稀释法即将高浓度的抗原通过适当的稀释，配制成系列浓度的标准品。 质控品主要是用于试剂盒的内部质量控制，因此质控品不需要进行赋值，而是用其相应的试剂盒对其进行多次测量，给出允许范围。质控品的制备方法同标准品的配制，也采用逐级稀释法将高浓度的抗原通过适当的稀释，配制成低、高两个梯度的质控品，再用试剂盒标定其浓度，通过20-30次的测