7.2超高分辨率显微镜：教学教材.pptVIP

超高分辨率显微镜：显微镜发展史上的新突破 ;显微镜技术经过长期发展，加之近年来物理学界接二连三出现的重大科研进展，终于，在2008年，显微镜发展史上的新成果——超高分辨率荧光显微镜为科学家所研制出。人们预言，它定会成为生物学家的好帮手。 ; Stefan Hell打破了物理学界的传统看法;早在上世纪80年代中期，当时师从德国海德堡大学（University of Heidelberg）一位低温固态物理学家的Stefan Hell就已经发现，如果不是像常规那样使用一个透镜聚焦，而是将两个大孔径的透镜组合在一起聚焦，就可以提高光学显微镜的分辨率。Stefan Hell是首位发现这一现象的研究人员 Hell于1990年顺利完成了他的博士学业，但同时，这也意味着他将无法再凭借奖学金的资助进行研究了。Hell最终决定独自一人继续在家研究以上的发现，并最终成功发明了4Pi显微镜。;起初，许多科学家，包括那些声名显赫的物理学家都认为Hell的工作对于提高光学显微镜的分辨率没有太大的意义。他们认为，Hell仅用他那少得可怜的科研经费来从事这项研究简直就是在冒险。但Hell却始终坚信他能够打破衍射极限。 时任美国马萨诸塞州坎布里奇市哈佛大学（Harvard University）化学系教授的Sunney Xie遇到了Hell，当他了解了Hell发明的4Pi高分辨率显微镜时，Xie对Hell勇敢地对传统物理学观点提出挑战的精神表示赞许。 随后，Hell带着他的发明来到了位于德国海德堡的欧洲分子生物学实验室（European Molecular Biology Laboratory, EMBL），并获得了德国科学基金会提供的奖学金。1991年，Hell在该实验室开始他的博士后研究工作。 Hell的努力没有白费，他的冒险终于获得了回报。1992年，Hell第一次用他的4Pi高分辨率显微镜证明了他的确能将传统光学显微镜的分辨率提高3-7倍。然而，尽管Hell提高了Z方向的分辨率，他还是没能突破衍射极限的限制。 ;此后不久，Hell又在芬兰土尔库大学（University of Turku）得到了他的第二个博士后职位。一个星期六的早晨，Hell正躺在研究生公寓的床上看一本有关光学量子理论的书，突然，灵光一闪，Hell脑海里浮现了一个想法：如果使用一种合适的激光，仅激发一个点的荧光基团使其发光，然后再用一个面包??样的光源抑制那个点周围的荧光强度，这样就只有一个点发光并被观察到了。Hell给他的这项发明取名STED，即受激发射损耗显微镜（stimulated emission depletion）。有了这个想法后，Hell立即行动，冲进实验室进行相关实验。每当回想起当时的心情，Hell都会觉得那是他科研生涯中最激动的时刻。;2 科研竞赛;2.1 Eric Betzig、Harald Hess以及Jennifer Lippincott-Schwartz小组;现在就职于美国弗吉尼亚州阿士伯恩霍华德休斯医学研究所珍妮莉娅法姆研究学院（Howard Hughes Medical Institute’s Janelia Farm Research Campus in Ashburn, Virginia）的Hess承认，自己与Betzig对生物学的认识都不深。不过近15年来，他们一直都在努力，希望能运用生物学知识获取高分辨率的显微图像，但是没有取得明显进展。然而，当Hess和Betzig了解到Lippincott-Schwartz和George Patterson在2002年发明的光敏绿色荧光蛋白（photoactivatable green fluorescent protein）后，他们知道他们已经找到了解决问题的关键所在。 ?回想起当时的情形，Lippincott-Schwartz指出：“他们当时非常激动。我还记得当我们得到第一张显微图像时，你根本无法看出那是什么东西。直到我看到他们将荧光图像和电镜图像叠加之后的结果才相信，我们成功了。我当时觉得这一切真是太神奇了。” ?? 2006年，Eric Betzig、Harald Hess以及Lippincott-Schwartz小组在《科学》（science）杂志上发表了他们的PALM研究成果。使用PALM可以清楚得看到细胞黏着斑和特定细胞器内的蛋白质。;2.2 Samuel Hess小组 ;2.3 庄晓威科研小组 ;3 超高分辨率显微镜的成绩;4 展望;尽管已有许多科学家从这项技术进展中获益，但是仍然可以进一步提高，以使更多的研究人员能够在自己的工作中使用它。到目前为止，那些成功应用此项技术的实验室都采取了正确的技术组合：研究人员可以很好地将物理学与生物学相结合——他们将显微镜装配并做适当的调节，然后用它对生物