RUBISCO与RUBISCO活化酶的生物学特性及其分离纯化-WORD文档.docVIP

Rubisco与Rubisco活化酶的生物学特性及其分离纯化 研究生：陈相辉 学号：01143 指导老师：王忠 教授 （扬州大学农学院农学系，扬州 225009） Rubisco（1,5-二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶，ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase）是光合碳代谢中的关键酶，处于光合碳还原和光合碳氧化这两个方向相反但又相互连锁的循环的交叉点上，调节着光合作用和光呼吸的代谢比例，其活性大小对光合速率起着决定性作用。 一般认为，在阳光下，有充足水分和肥料的田间，植物的光合生产力受其CO2固定反应所限制（李立人，1989）。因此若能增加空气中CO2的浓度，则可使光合速率上升；若能降低空气中O2的浓度，抑制其加氧酶的反应，也可使植物的光合速率增加。然而大气中CO2和O2的浓度是一定的，分别为0.03%和21%，因此如何提高Rubisco酶的活性或者提高羧化酶和加氧酶反应的相对比值，从而提高植物的净光合速率，便成为人们研究的一个重要课题。 Rubisco在叶片中含量很高，占可溶性蛋白的50%以上，然而此酶的催化活性却很低，酶的活化成为植物光合作用碳同化的限制因素。通常认为该酶受CO2、Mg2+、光等因素调节，但在酶活化机制的研究中仍然存在很多矛盾。近年人们在多种植物发现一种调节Rubisco活性的酶,称Rubisco活化酶(Rubisco activase)（Salvucci et al.,1985;1987）。该酶是一种核编码的叶绿体蛋白,其活性被ATP促进。Rubisco和Rubisco活化酶的特性一直光合作用研究热点问题，目前，对Rubisco及其活化酶的研究已取得了重大进展，不仅提纯了Rubisco及Rubisco活化酶，建立了活性测定方法（，1980；唐如航，1997），而且鉴定了它们的氨基酸序列（Shen1992）克隆了它们的cDNA，完成了它们的基因表达（Hartman etal，1994；King-Ying To etal，1997）,人们还研究了各种磷酸糖与Rubisco活化酶的相互作用，初步探讨了外界因素对两者的影响。 Rubisco与Rubisco活化酶的发现、结构及其活性调节 Rubisco的发现、结构及其活性调节 1.1.1 Rubisco的发现 1947年，Wildman 和Bonner首先从菠菜叶片细胞中发现了组分1蛋白，其后又发现组分I蛋白广泛存在于植物体中，是绿色植物叶片中可溶性蛋白的主要组分。后来Weissbach A等在1956年证明了组分I蛋白就是催化光合作用中CO2固定的RuBP羧化酶，1971年Orgren W L等又发现RuBP羧化酶是一个双功能酶，还能催化RuBP的氧化作用。此后该酶就被称为核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶，简称Rubisco。目前许多植物的Rubisco蛋白都已被结晶，例如烟草的Rubisco晶体呈立方体状，油菜的Rubisco蛋白除了呈立方体状外，还有呈棱台状的（应燕如等，1986）。 Rubisco存在于叶绿体间质中，占叶片可溶性蛋白质50%以上，是地球上最为丰富的蛋白质（Ellis R J. 1979），也是地球上唯一可从空气中大量固定CO2的酶，据估计每年约固定5×1014kg的CO2 (李立人,1998)。Rubisco的研究在光合作用理论和实践上都非常重要，引起了国内外许多学者的重视。 1.1.2 Rubisco的两种类型 类型I （分子量为560 000）是由8个大亚基（50×103～60×103d）和8个小亚基（12×103～18×103d）组成(L8S8)的，广泛存在于所有真核和大多数原核的光合有机体中。 类型Ⅱ Rubisco仅由2个大亚基构成，存在于一种紫色非硫光合细菌深红红螺菌（Rhodospirillum rubtnm）。虽然类型ⅡRubisco不含有小亚基，但它同样像类型I Rubisco一样催化RuBP的羧化和氧化两个反应。 1.1.3 Rubisco的作用机制 Rubisco（EC4.1.1.39，）是光合碳代谢中的关键酶，催化光合碳代谢中CO2固定，使RuBP与CO2形成2分子3-磷酸甘油酸，同时催化光呼吸中的第一个步骤，使RuBP与O2反应产生1分子3-磷酸甘油酸和1分子磷酸乙醇酸（图0-1）。Rubisco处于光合碳还原和光合碳氧化这两个方向相反但又相互连锁的循环的交叉点上，调节着光合作用和光呼吸的代谢比例，其活性大小对光合速率起着决定性作用（Jensen等1977，Portis 1992、1995，Austin 1999，Mann1999）。 1.2 Rubisco活化酶的发现、结构及其特性 1.2.1 Rubisco活化酶的发现 Rubisc