2、菌种与育种技术.pptx

本课内容工业微生物微生物的育种技术诱变育种细胞融合育种基因工程育种微生物的主要类别古生菌 Archaea原核微生物细菌细菌 Bacteria放线菌 Actinobacteria酵母 Yeasts真核微生物真菌 Fungi霉菌 Molds蕈菌 Mushrooms与基础生物学所关注的共性相对，（微）生物的多样性才是生物工程的灵魂！放线菌放线菌：G+，好氧，其第一个显著特征是虽为原核生物，却与真核生物霉菌有很相似的形态分化，形成菌丝。主要以无性孢子的方式进行繁殖。放线菌的第二个显著特征是，它们是“有价值的次级代谢产物之王”，与其它微生物相比显示出了压倒性的合成多种多样的化合物的能力。目前发现的微生物来源的抗生物质中有接近70%是放线菌的产物。放线菌在放线菌中又以链霉菌属Streptomyces特别突出，大部分有价值的活性物质是它们的产物，如链霉素、红霉素等抗生素，正定霉素等抗癌剂。一般来说放线菌在无氧条件下不能生长，最适温度25~35 ℃，最适pH在中性左右。即使是纯培养的放线菌也较容易发生变异，因此如何能稳定保存放线菌一直是围绕研究人员的一个难题。有两种链霉菌的基因组序列已经公布：Streptomyces coelicolor A3(2)[8.66Mb]和Streptomyces avermetilis。放线菌放线菌的质粒有两类：一类是可达600kbp的巨大线状质粒，有些质粒携带有抗生素产生相关的全部基因。另一类是约为几十kbp的环状质粒，通过改造可以使其适用于分子克隆、蛋白质表达等。在噬菌体方面，已经发现的既有广宿主范围的噬菌体，也有窄宿主范围的噬菌体，其中以对ΦC31的研究最为详尽。酵母菌酵母菌yeasts：主要以出芽或分裂方式进行繁殖的一类真核单细胞生物，大约有97属723种酵母，分属于子囊菌门Ascomycota和担子菌门Basidiomycota。工业上常用的酵母有酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris、解脂亚洛酵母Yarrowia lipolytica。S. cerevisiae及其近缘菌种在古代就已经被用来制造啤酒、葡萄酒、面包等。Y. lipolytica 等酵母可生产作为家畜饲料的单细胞蛋白。S. cerevisiae 和P. pastoris是外源重组蛋白的表达宿主，在制药工业中应用广泛。酵母菌酵母一般为好氧菌或兼性厌氧菌，有些在饥饿状态下可形成丰富的菌丝或假菌丝。S. cerevisiae 是安全性最高的酵母之一，是第一个基因组序列被测定的真核生物（1996），其S288c系统株的基因组包含16条染色体，全长13.4Mbp，有约5500个基因。针对S. cerevisiae的基因操作技术已经相当完善，有多种人工改造的质粒载体可用于基因工程，至今仍作为重要的模式生物，在科研和生产中都有重要地位。酵母菌裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe：从东非地区的啤酒中分离获得的一种以分裂方式进行生殖的酵母，被广泛用于基础科研。S. pombe有3条染色体，全长13.8Mbp，共有约4900个基因。实验室常用株系是L968(h90)及其派生株系。巴斯德毕赤酵母P. pastoris：是一种可以以甲醇为唯一能源的酵母，可以130g/l干重细胞以上的规模进行高密度发酵，是表达外源重组蛋白质的重要宿主系统。霉菌霉菌：也称丝状真菌，在生长时细胞会形成线状的菌丝，在酿酒、制作酱油传统发酵食品的生产中有重要作用，也用于生产抗生素、有机酸等。典型的霉菌的生活史包括无性和有性两个阶段，一般属于壶菌门、接合菌门、子囊菌门、担子菌门和半知菌类。霉菌区别于其他生物的明显特征就是具有含多个细胞核的多核细胞，对于在工业上有重要应用的菌株，有必要制备稳定遗传的同核体（homokaryon）。霉菌工业上常用的霉菌有米曲霉Aspergillus oryzae、黑曲霉Aspergillus niger、米根霉Rhizopus oryzae和产黄青霉Penicillium chrysogenum。米曲霉Aspergillus oryzae ：很久以前就被用来制作食品酱、酱油、酿酒，分生孢子呈黄色或黄绿色。其淀粉水解酶高产菌株适于酿酒，而蛋白水解酶高产菌株则使用酿造食品酱和酱油。米曲霉同时也是生产各种蛋白酶、淀粉酶及蛋白质的理想微生物。霉菌A. oryzae的基因组测序已于2004年被日本完成，基因组大小约37Mbp，包括约14000个基因。黑曲霉Aspergillus niger：分生孢子为黑色，产有机酸能力强，在工业上用于生产柠檬酸、葡萄糖酸，也用于生产多种水解酶。青霉菌Penicillium：分生孢子为青绿色。最初用于青霉素生产的菌株是Penicillium notatu