生物制药学第三章基因工程制药.ppt

基因工程表达一药物蛋白研究阶段和生产阶段分离纯化策略 重组类人胶原蛋白 胶原是结缔组织的结构蛋白 胶原蛋白是在提取胶原时，结构没有改变的一类蛋白 羟脯氨酸 重组类人胶原蛋白是通过逆转录在人体中钓取基因后，进行了某些位点的突变，并在大肠杆菌中表达的重组蛋白 分子量70，000 方法：亲和层析纯化  发酵后的工程菌，5000r/min离心30分钟 质液比1：6将菌体悬浮于细胞破碎缓冲液中（1mmol/LEDTA,5mmol/LTris） 冰水浴中超声波破碎仪间断超声十次，每次90秒 破碎液于4℃，5000r/min离心1小时，收集上清液 上清液用硫酸铵分级沉淀 收集15%~65%饱和度的蛋白质沉淀 沉淀溶解在缓冲溶液中（20 mmol/ LTris-HCl，pH8.0） 截流分子量30，000的超滤膜脱盐浓缩 脱盐的样品和平衡缓冲液（1mmol/LNaCl）1：1混合 层析柱用锌离子充分螯合，并用10倍体积的平衡缓冲液平衡 上样后，平衡液冲洗，挂柱 100 mmol/ L的NH4Cl洗脱 * 包含体产物分离工艺（牛生长激素分离提取） 第十节 基因工程药物介绍 一、重组胰岛素 胰岛素的作用是降低血糖浓度，达到治疗糖尿病的目的 猪胰岛素,不良反应 1982年开始，美国等批准用DNA重组技术生产的人源化胰岛素 三种生物合成胰岛素的方法 (a) A