海洋生物仪器分析教学大纲_百度文库.docVIP

海洋生物仪器分析实验教学大纲 一、制定本大纲的依据 课程主要目的是为了使学生了解现代生化实验技术的进展情况及实际应用，提高学生的实验操作技能，培养学生独立分析和解决问题的能力，适应研究工作的需要，以期能够为顺利开展科研工作打下基础。通过本课程学习，要求学生学习了解实验设计原理及生化实验技术理论的应用。经实践，掌握生物化学研究工作中应用广泛且重要的技术方法与实验技能。适应研究工作的需要，掌握一定的独立解决问题的能力，以期能够为顺利开展科研工作打下基础。 二、本实验课程的具体安排 实验项目的设置及学时分配 三、本实验课在该课程体系中的地位与作用 本课程的教学主要采用实验，48课时全部为实验，是为海洋生物专业本科高年级学生开设的一门课程，设计及研究性实验，在实验过程中，通过对一些大型仪器的操作讲解及实验过程中学生们亲手操作，使学生对这些大型仪器的基本工作原理及操作能够基本掌握，通过实验教学，强化实验技能训练，使学生全面掌握生物技术高层次的仪器及实验技术，培养学生理论联系实际、实事求是的学风，提高分析问题、解决问题的能力，掌握基本的专业实验技术和操作技能，提高学生独立思考和创新能力。同时与毕业设计和后续的研究生教育接轨。 四、学生应达到的实验能力与标准 1、使学生了解并掌握在海洋生物研究中用到的一些仪器，通过具体的实验操作，使学生们能够理论联系实际，系统地掌握一些仪器的使用操作技能， 2、使学生在实际工作中能够正确地选择和运用各种仪器来进行解决生物研究过程中的难题，培养学生综合分析和解决问题的能力。 3、培养学生从事与生物技术相关科研与生产的能力。 五、讲授实验的基本理论与实验技术知识 1、酵母细胞的破碎及破碎率的测定 掌握超声波细胞破碎的原理和操作；学习细胞破碎的评价方法。原理：频率超过15-20kHz的超声波，在较高的输入功率下可以破碎细胞。随后用显微镜观察破碎的情况，计算破碎率。 所需仪器设备：超声波细胞破碎机、高压灭菌锅、显微镜、血球计数板、接种针、载玻片等。 基本耗材：乙酸、乙酸钠、琼脂、蔗糖等。 2、脂肪含量的测定及高级脂肪酸组分分析(气相色谱法) 高级脂肪酸与丙三醇或高级一元醇能生成单脂，单脂再与磷酸、含氮碱或糖类结合可构成复合脂。单脂和复合脂参与细胞、细胞器等结构组成，具有多方面的生物学功能。高级脂肪酸的差异，往往限于不同的物种、品种或个体具有不同的遗传或生理持性。局级脂肪酸中的亚油酸、亚麻酸、花牛四烯酸等是人和动物的必需脂肪酸，完全依赖从食物中获得。因此，生物材料成农牧产品中高级胎肪酸组分的分析在生物科研和食品营养评价中都具有重要意义。本实验介绍脂类的抽提定量方法；通过油脂高级脂肪酸组分的定性定量分忻，了解气相色谱仪的结构、原理及在生化分析中的应用。 所需仪器设备：分析天平 恒温水浴、索氏脂肪抽提器、气相色谱 基本耗材：石油醚、氢氧化钠、乙醇、甲醇、苯等。 3、叶绿素a的测定（荧光分光光度法） 以丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，据提取液酸化前后的荧光值，可以分别计算叶绿素a及脱镁色素的含量。 所需仪器设备：荧光分光光度计、冰箱、离心机、抽滤装置、干燥器等。 基本耗材：玻璃纤维素滤膜、丙酮等。 4、蛋白质的双向电泳 双向电泳是把两种不同的电泳分离程序结合在一起的技术。与任一单项电泳相比，它能获得更多的有关蛋白质混合物的性质。通常以柱状等电聚焦作第一向电泳，而以板状SDS电泳等作第二向电泳。这是当今灵敏度最高的电泳方法。 所需基本仪器：垂直管型电泳槽、电泳管、垂直板形电泳槽、稳压稳流电泳仪、精密pH计、微量加样器等。 基本耗材：Acr、Bis、NP-40、Ampholine、SDS、琼脂糖、Tris、考马斯亮蓝R-250等。 5、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质 聚丙烯酰胺凝胶电泳之所以能将不同的大分子化合物分开，是由于这些大分子化合物所带电荷的差异和分子大小不同之故，如果将电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，这些化合物在凝胶上的迁移率则完全取决于相对分子质量。SDS是十二烷基硫酸钠的简称，它是一种阴离子去污剂，它能按一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物．其负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷，也就消除或降低了不同蛋白质之间原有的电荷差别，这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一个因素，就可根据标准蛋白质的相对分子质量的对数对迁移率所作的标准曲线求得未知蛋白质的相对分子质量。SDS—聚丙烯酰胶凝胶电泳(SDS)可以用圆盘电泳，也可以用垂直平板电泳，本实验用目前常用的垂直乎板电泳，样品的起点一致，便于比较。 所需仪器设备：直流稳压电泳仪、垂直平板电泳槽、移液器、微量注射器。 6、离子交换层析法分离氨基酸 通过实验要求学会装柱、洗脱、收集等离子交换柱层析技术。原理：树脂(惰性支持物)上