基因的转移与重组体的检测②differencecloningbypcr.pptVIP

第一项免疫筛选技术发展于上世纪70年代晚期。最早使用质粒载体进行表达筛选。 八十年代中期改用噬菌体载体进行表达筛选。 As long as the expressed protein is functional and that function can be exploited to screen an expression library, the corresponding clone can be identified. 制备探针注意问题： 核苷酸探针长度17～20个核苷酸； 合成一组混合的探针； 根据密码子的使用频率，合成猜测体探针。 根据蛋白质序列也可以将编码该蛋白质的基因扩增出来。在基因文库中注册的蛋白质序列都可以找到相应的DNA或cDNA序列。如蛋白质序列是自己测定的,那么需要设计至少1对简并引物(degenerated primer),从cDNA文库中克隆该基因。以这种方法克隆的基因必须做序列测定才能鉴别所扩增产物的特异性。 要注意cDNA片段在表达载体中的方向和阅读框问题 互补分析只有在有合适的突变表达宿主存在时才能使用，但在很多情况下，目的基因的功能对一项技术来说太独特了，无法在细菌和酵母表达宿主中进行研究；而且，即使是在高等的真核生物表达体系中，宿主功能的缺失也可能可以由一个或多个其他的基因来全部或者部分地弥补。因此，后来又发展了另一种方式来筛选，即