pcr技术的发展及其在感染性疾病诊断中的应用---黄毅.ppt

HPV型别有地理位置差异 HPV16、18型感染很普遍，没有明显的地区差异 HPV45型在来自非洲西部宫颈癌组织中很常见 HPV39和59型仅在美洲的中部和南部宫颈癌组织中出现 HPV52，58型在中国妇女中检出率较高 HPV的型别还与宫颈癌的病理类型有关 在宫颈鳞状上皮细胞癌中HPV16占主要地位（51%的鳞状上皮细胞癌标本），而在宫颈腺状上皮细胞癌（56%腺状上皮细胞癌标本） 和宫颈腺鳞细胞癌（39%腺鳞细胞癌标本）中HPV18占主要地位 * 一人世间枯燥　　 以下三个关键词指的是一种东西，在Google或者NCBI Pubmed上可以输入以下关键词就可找到高通量测序的相关文献和内容。 1、无需构建文库，直接加接头，PCR扩增。 2、自动化程度高，简单易操作。 3、并行测序，高通量，一个Run可测最少百万级的序列。现在一个流程最高通量水平已经可以达到10亿条序列。 Lynx Therapeutics MPSS极其复杂，没有商业化，2004年并入HiSeq。Polony seq由哈佛George Church实验室开发，使用连接测序，后来并入ABI SOLiD平台。454焦磷酸测序由454 Life Sciences开发，是第一个商业化高通量测序平台，后被Roche收购。HiSeq在lynx MPSS的基础上简化开化了Sequencing by Synthesis，后被Illumina收购。ABI SOLiD在Polony Seq基础上开发了连接测序。Helicos是单分子测序，其特点是没有PCR扩增过程。2010的Ion torrent和其他的不同，不是以荧光进行检测信号 现在应用的比较多的是前三种机子，下面主要对这三种机子及其测序原理做一个简单介绍。 1、从病变组织内分离出HCMV病毒是“确证”HCMV感染的依据。 2、HCMV感染宿主范围窄，只在人成纤维母细胞中增殖，细胞肿大形成巨细胞性细胞，肿大的细胞核内和胞浆内可查见嗜酸性包涵体。 3、此方法对技术条件要求高、敏感性受到许多因素的影响、费时，达不到早期快速诊断的目的。 病毒分离培养 人巨细胞病毒 1、HCMV感染的血清学诊断方法通常有补体结合试验、酶联免疫吸附试验、乳胶凝集法等。 2、?HCMV原发感染后，IgM和IgG抗体相继出现，一般在感染后的2-4周才可检测到，故不适用于早期诊断。 婴幼儿---IgM假阴性 3、IgG抗体阳性只表明既往感染，由于HCMV感染具普遍性，血清学诊断方法只是为HCMV感染提供间接的证据。 血清学检测 人巨细胞病毒 HCMV-DNA定量检测 人巨细胞病毒 是反映HCMV病毒感染活动与否的直接和客观指标，有助于鉴别HCMV健康携带者体内病毒的低水平复制与相关疾病患者高水平活动感染。 孕妇、胎儿、新生儿HCMV 感染的诊断 器官移植受者HCMV 感染的监测 HIV 患者及其他免疫力低下者HCMV 监测 药物疗效观察，根据病毒拷贝数量制定个性化治疗方案 人巨细胞病毒（HCMV）PCR标本选择 1）血液，尿液，唾液，乳汁，精液，脑脊液，宫颈分泌物等均可为标本。 2）尿液阳性率高（易侵袭肾小管上皮细胞） 3）需反复、连续、多次检查，提高阳性率。 （间歇性排毒性质，处于不排毒状态，--假阴性） 人巨细胞病毒 四　常见性传播疾病病原体 淋球菌（NG） 沙眼衣原体（ CT ） 解脲脲原体（UU） 乳头瘤病毒（HPV） 单纯庖疹病毒（HSV） 梅毒螺旋体（TP） 人类免疫缺陷病毒（HIV） STD NG、CT、UU 淋球菌（NG）感染与致病 1. 人是淋球菌的惟一宿主。 2. 发病率最高，在所有STD疾病中，高达60%左右。 3. 发病趋势： a. 男性多于女性。 b. 城市走向农村， c. 高收入阶层向低收入阶层扩展 4. 人对淋球菌感染无天然抵抗力，且免疫不持久，再感染和慢性患者普遍存在。 5. 如母亲为淋病患者，婴儿出生时易患上淋球菌性结膜炎 CT 沙眼衣原体（CT）感染与致病 1. 严格的细胞内寄生。 2. 不仅可致眼部感染、肺部感染、也是STD的主要 病原体。 3. 近年来在欧美等国，沙眼衣原体的感染率和危害 性已超过淋球菌而居STD之首。 4. 在我国，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。 5. 泌尿生殖道感染，妨碍妊娠。 6. 盆腔感染，可致生殖能力损害。 NG、CT、UU 1. 严格的细胞内寄生。 2. 不仅可致眼部感染、肺部感染、也是STD的主要 病原体。 3. 近年来在欧美等国，沙眼衣原体的感染率