免疫组化技术- 免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用.ppt

免疫组织化学技术 西南医院病理学研究所 冯俊明 免疫组织化学（简称免疫组化）是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 近十年来，免疫组化技术发展很快，在现代医学的基础和临床研究中发挥着重要的作用，对疾病，尤其是对肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机理的研究提供了强有力的手段，但随着免疫组化标记物的增多和利用，原为特异的标记物并非绝对特异，而且出现交叉反应和异常表达的情况日益增多。故对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应在光镜观察组织形态的基础上，合理使用免疫组化技术，审慎判断其标记的意义。 免疫组化标记的形态学特征 免疫组化标记具有形态学特点，若能熟练掌握则有助于对免疫组化标记结果的正确判断，现择要分述如下： 一、阳性标记色度特征 免疫组化标记时细胞阳性着色程度取决于抗原含量、分布密度和标记方法及其敏感性。一般而言，抗原含量越多，分布密度越高，标记方法越敏感，阳性结果显色则越强。根据阳性标记的显色程度分为：淡黄色，提示为弱阳性；棕黄色，为中等度阳性；棕黑色，示为强阳性。在结果判断中，后两者较有意义，可作为判断依据。而前者除考虑标本处理和方法学因素外，可能与细胞只有轻度异常表达，或某些细胞摄取了周围组织抗原之故。 二、阳性标记细胞学特征 免疫组化标记中，阳性标记细胞学特征是反映抗原在细胞中的定位和分布情况。在诊断中阳性细胞以拟标记的细胞为前提，阳性表达必须在细胞特定的抗原部位，若不在抗原所在部位的阳性表达和非目标细胞即使阳性也不应作为判断依据。根据抗原在细胞中分布和阳性颗粒沉淀部位可分为以下5种类型： 1.胞膜型 阳性颗粒主要分布于细胞膜表面，形成一薄层棕黄色颗粒包绕整个细胞。此类型常见于某些膜抗原，如上皮膜抗原（EMA）、白细胞共同抗原（LCA）及B细胞、T细胞、粒细胞相关抗原（GAA）和Ki-1等。 2.胞核型 阳性颗粒定位于细胞核，呈均匀分布或位于核膜下，有的呈小斑块状不规则分布。此多见于增殖细胞核抗原、Ki-67及激素受体中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和基因p53等。 3.胞浆型 阳性颗粒主要分布于细胞浆。大部分抗原均属于此种类型，如细胞角蛋白、波形蛋白、结蛋白、神经丝蛋白、肌红蛋白、α1-抗胰糜蛋白酶及前列腺特异性抗原（PSA）等。依据抗原在胞浆内分布形式，通常表现为弥漫性分布或局限性分布。前者阳性颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆。局限性是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细胞浆中的某一部位、核周或细胞浆的一侧。 4.微绒毛型 抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒毛，而胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表达。这种表现形式最常见于各种腺癌，如甲状腺腺癌、乳腺腺癌、胃肠腺癌、胆道腺癌、卵巢浆液性腺癌等。其特点是阳性颗粒除靠近腔面阳性外，其余基底部可呈阴性反应。在肿瘤标记物中多见于上皮膜抗原、上皮特异性抗原、结肠相关抗原、卵巢癌抗原等。甲状腺腺癌中甲状腺球蛋白常以该形式出现。 5.复合型 在常规免疫组化标记中，同一种抗原可以同时表达于胞膜和胞浆、胞核和胞浆、微绒毛和胞浆，但很少发现胞膜和胞核同时表达。值得注意的是组织标本固定不及时造成抗原移位或乳腺ER和PR修复不充分也可以发生胞核和胞浆同时阳性。 三、阳性标记组织学特征 根据免疫组化阳性细胞的组织学特点，免疫组化阳性细胞或阳性颗粒可呈以下类型排列： 1.局灶型 阳性细胞呈不规则小灶性分布。阳性细胞可多可少，排列不规则，无固定排列形式，阳性染色深浅不一。细胞角蛋白、上皮膜抗原在低分化鳞状细胞癌、腺癌和癌肉瘤；肌动蛋白和结蛋白在低分化横纹肌肉瘤；NSE、神经丝蛋白、突触素在恶性神经内分泌肿瘤及低分化星形胶质细胞瘤中胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和恶性黑色素瘤中S-100蛋白等均可表现为局灶性阳性。 2.弥漫型 阳性细胞呈弥漫性分布，细胞间无连接，也可以单个细胞散在分布。此型中细胞几乎都高度表达某种抗原，如淋巴瘤（白细胞共同抗原）、Hodgkin病（粒细胞相关抗原、Ki-1）、胃肠未分化癌癌胚抗原（CEA）及上皮膜抗原、尤文瘤中CD99等。 3.片块型 较常见。阳性细胞多为细胞浆表达，细胞间界限较清晰，但相互融合呈片状或团块状结构。此型可见于上皮源性肿瘤、某些向上皮分化的间叶源性肿瘤、恶性黑色素瘤、中分化神经内分泌瘤及核形细胞瘤（如癌肉瘤和神经纤维瘤、平滑肌肉瘤）。 4.网状型 此型主要见于细胞密度较大的大细胞肿瘤，标记物多为膜抗原。阳性细胞膜与膜间相互紧靠，而胞核呈阴性反应，免疫组化标记显示网状结构。 5.腺管型 主要见