中国药典2010年版－－紫外分光光度法讲义.pptVIP

紫 外 分 光 光 度 法 定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收，对该物质进行定性和定量分析的方法。 适用范围：鉴别、检查和含量测定。 特点：简便、快速、专属性强、灵 敏度高 一. 光波和光谱 色散：将白色光分解成各种单色光的现象 光谱：经过色散以后的单色光依固定的次序排 列而成的现象。 光和无线电波以及各种射线本质上都是电磁波，他们的主要区别在于波长（频率）的不同。 0.1 1 102 104 106 108 1010 宇宙线 γ射线 紫外光 红外光 微波 无线电 可见光 单位：埃 二. 物质对光选择性的吸收 物质的颜色是由于他对可见光选择性地吸收一部分光波所致。 有色溶液的颜色实质上是被吸收光颜色的补色。 光线照射某些物质后，引起物质内部分子、电子或原子核间的运动状态的变化，剩余能量透射出来，通过分光系统可得到一组不连续的光谱，此光谱称为吸收光谱（absorption spectra) 吸收光谱的产生：电子跃迁理论，与分子结构有关， 三.光吸收基本定律和吸收系数 1.光吸收基本定律： 比尔—郎伯（Beer—Lambert）定律为光吸收基本定律，是分光光度分析的理论基础。 Lambert于1730年提出了光强度与吸收介质厚度的关系。1852年Beer提出了光强度与吸收介质中吸光物质浓度之间的关系。 透光率： 单色光通过一物质的溶液时透过光的强度（I）与入射光的强度（I0)之比称为透光率或透射比（T）。 T ＝ I ／ I0 吸收度： 透光率的负对数称为吸收度或光密度。 A=log1/T=－logT 郎伯（Lambert）定律: 当溶液浓度不变时，吸收读与溶液的液层厚度成正比。 比尔（Beer）定律： 当溶液液层厚度不变时，吸收度与溶液的浓度成之比。 郎伯—比尔（Lambert— Beer ）定律: 单色光通过一物质的溶液时，如果入射光的强度不变，溶液吸收度（A）与溶液浓度（C）和液层厚度（L）成正比。 A=log1/T=ECL 式中E为吸收系数 2.吸收系数： 定义：吸光物质在单位浓度和单位液层厚度时的吸收度。 表示方法： （1）百分吸收系数（E）： 当溶液浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm时，相应的吸收度为百分吸收系数，以E表示。 E=A/C(%)×L(cm) 中国药典规定的吸收系数即为E。 （2）摩尔吸收系数（ε）： 当溶液的浓度（C）为1mol/L,光路长度（L）为1cm时，相应的吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。 　　 ε =A/C(mol/L)×L(cm) ε和E的关系是： ε=E×分子量/10 E= ε ×10/分子量 3.吸收系数测定法 精密称取一定量精制样品，使样品溶液配成吸收度读数在0.6～0.8之间，置1cm吸收池中，在规定波长±2nm处测定吸收度，然后再用同批溶剂将溶液稀释1倍，使吸收度在0.3～0.4之间，再按上述方法测定。样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份结果，对平均值的偏差应不超过土0．3％，否则应重新测定。测定时，先按仪器正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定，直到减小狭缝吸光值不增加为止，取吸收度不改变的数据。再用4台不同型号的仪器复测。 测定注意事项： 1.样品应为精致品，水分应另取样测定，扣除干燥失重。 2.所用的容量仪器及分析天平应经过检定，如有误差应加上校正值。 3.测定所用的溶剂，其吸收度应符合规定。吸收池应于临用时配对。 4.称取样品时，其称量准确度应按中国药典规定要求。 5.分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸收度精度要进行校正。要注明测定时的温度。 四.分光光度计 基本原理框图： 一.光源 对光源的