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第六章 酶工程制药 酶的特性 酶是由活细胞产生的具有特殊催化 功能的一类蛋白质。其特点： ①催化效率高 ②专一性强 ③反应条件温和 ④催化活性受到调节和控制 第一节 概 述 一、酶工程简介 酶工程是酶学和工程学相互渗 透结合发展而形成一门新的技 术学科。它是从应用的目的出 发研究酶、应用酶的特异性催 化功能，并通过工程化将相应 原料转化成有用物质的技术。 二、酶的来源 三、酶的生产菌 ⒈对菌种的要求 ⒉生产菌的来源 ⒊目前常用的产酶微生物 第二节 酶和细胞固定化 一、固定化酶的制备 ⒈固定化酶的定义： 固定化酶是指限制或固定于特定空 间位置的酶，具体来说，是指经物 理或化学方法处理，使酶变成不易 随水流失即运动受到限制，而又能 发挥催化作用的酶制剂。 ⒉固定化酶的特点 具有生物催化剂的功能，又有固相催化剂的功能。 ①可多次使用 ②反应后，酶底物产物易分开，产物 中无残留酶，易纯化，产品质量高。 ③反应条件易控制。 ④酶的利用效率高。 ⑤比水溶性酶更适合于多酶反应。 ⒊酶的固定化方法与制备技术 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） ⑴载体结合法 ①物理吸附法 ②离子结合法 ③共价结合法 ⑵交联法 ⑶包埋法 ①网格型 ②微囊型 ⑷选择性热变性法 ⒋酶和细胞的固定化载体 ⑴吸附载体 ⑵包埋载体 ⑶共价结合载体 ⒌固定化酶制备技术 ⑴吸附法制备固定化酶技术 ⑵包埋法制备固定化酶技术 ①界面沉降法 ②界面聚合法 ⑶交联法制备固定化酶技术 ⑷共价结合法制备固定化酶技术 二、固定化细胞的制备 ⒈固定化细胞的定义 将细胞限制或定位于特定空间位 置的方法称为细胞固定化技术。 被限制或定位于特定空间位置的 细胞称为固定化细胞。 ⒉固定化细胞的特点 有细胞特性，生物催化剂功能，固相催化剂特点。 优点： ①无须进行酶的分离纯化 ②保持酶的原始状态，酶回收率高 ③比固定化酶稳定性高 ④细胞内酶附助因子可再生 ⑤细胞本身含多酶体系 ⑥抗污染能力强 ⒊固定化细胞的制备技术 ⑴载体结合法 是将细胞悬液直接与水不溶性的 载体 相结合的固定化方法。 ⑵包埋法 将细胞定位于凝胶网格内的技术。 ⑶交联法 用多功能试剂对细胞进行交联的固 定化方法。 ⑷无载体法 靠细胞自身的絮凝作用制备固定 化细胞的技术。 三、固定化方法与载体的选择依据 ⒈固定化方法的选择 ⑴固定化酶应用的安全性 ⑵固定化酶在操作中的稳定性 ⑶固定化的成本 ⒉载体的选择 四、固定化酶和固定化细胞的形状与性质 ⒈固定化酶的形状 ⑴颗粒状固定化酶 ⑵纤维状固定化酶 ⑶膜状固定化酶 ⑷管状固定化酶 ⒉固定化酶的性质 ⑴酶活力的变化 ⑵酶稳定性的变化 ①操作稳定性 ②贮藏稳定性 ③热稳定性 ④对蛋白酶的稳定性 ⑶酶学特性的变化 ①底物专一性 ②最适pH ③最适温度 ④米氏常数 ⑤最大反应速度 3.固定化细胞的形状与性质 ⒈固定化细胞的形状 ⒉固定化细胞的性质 六、固定化酶活力的测定方法 酶活力:在单位时间内单位体积中 的底物减少量或产物增加量来表示。 ⒈分批测定法 ⒉连续测定法 第三节 固定化酶和固定化细胞的反应器 一、反应器的类型和特点 ⒈间歇式搅拌罐反应器 用于游离酶反应后随即放料。 ⒉连续流动搅拌罐反应器 连续进料、连续出料 ⒊添充床反应器 固定化酶添充于床层内。反应器 内的流体的流动形态为平推流形。 底物以恒定流速通过反应床。 ⒋流化床反应器 底物以足够大的流速向上通过固定化酶床层，使固体颗粒处于流化状态，达到混合的目的。 ⒌循环反应器 部分反应液流出和新加入底物流入液混合，在进入反应床进行循环。 ⒍连续流动搅拌罐-超滤膜反应器 由连续流动搅拌罐反应器和超滤装置组合而成的反应器。它在连续流动搅拌罐的出口处装有半透膜。 ⒎其它反应器 二、反应器的选择依据 ⒈根据固定化酶的形状来选择 ⒉根据底物的物理性质来选