紫外分光光度法测定水果或蔬菜中的维生素C含量.pptVIP

* * 实验93 紫外分光光度法测定水果（或蔬菜）中的维生素C含量 93.1 实验目的 (1) 掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。 (2) 掌握水果（或蔬菜）中的维生素C含量的测定方法。 93.2 实验原理 紫外快速测定维生素C法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243 nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。 ???（一）标准曲线的制作 ????1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10 mg，加2 mL 10%盐酸，加蒸馏水定容至100 mL，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100 μg·mL-1。 93.3 操作步骤 ?????? 2. 标准曲线的绘制 ? 1 2 3 4 5 6 7 8 标准抗坏血酸溶液加入体积/mL 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.2 9.0 总体积/mL 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 抗坏血酸溶液浓度/(μg·mL-1） 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 3．消光值的测定：以蒸馏水为空白，在243 nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（μg）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。 （二）样品的测定 1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00 g于研体中，加入2～5 mL 1% HCl，匀浆，转移到25 mL容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（10000 g, 10 min）来消除。 2．样品的测定：取0.1～0.2 mL提取液，放入盛有0.2～0.4 mL 10%盐酸的10 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243 nm处测定其消光值。 3．待测碱处理液的制备：分别吸取0.1～0.2 mL提取液，2 mL蒸馏水和0.6～0.8 mL 1 mol·L-1 NaOH溶液依次放入10 mL容量瓶中，混匀，15min后加入0.6～0.8 mL 10% HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243 nm处测定其消光值。 　　4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素C的含量。 　　5．也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的维生素C的含量。 93.4 计算 ???????????????????　　　???　 μ×V总 维生素C的含量（μg/g）= ———— ??????????????????　　　????? ?V1×W总 式中：μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量 　　　　　　（μg） 　　　V1——测消光值时吸取样品溶液的体积（mL） 　　　V总——样品定容体积（mL） 　　　W总——称样重量（g） 93.5 问题讨论 　　（１）除了本实验中的方法外，抗坏血酸还有哪些测定方法? （1）除了本实验中的方法外，抗坏血酸还有哪些测定方法? 答：一、氧化还原法 　　 1. 直接碘量法 　　 2. 2,6-二氯酚靛酚滴定法 　　二、分光光度法 　　 1. 紫外快速测定法 　　 2. 2,4-二硝基苯肼法 　　 3. 高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸 　　三、光电比浊法 　　四、电化学法 　　五、荧光分析法 　　1. 抗坏铁酸的微量荧光测定法 　　 2. 抗坏铁酸总量的荧光测定法 93.6 参考答案? * * * * *