人类AHI1蛋白SH3结构域的初级晶体学研究.pdfVIP

摘要 摘 要 AHll(Abelson stie-1)基因是一个导致非白血性白血病和 helperintegration 淋巴瘤的助前病毒整合位点，它与原癌基因c．myb有着十分紧密的联系。目前的 研究表明彳删基因的突变与致白血病物质生成有关，AHll基因的突变会也是引 起Joubert综合症的一个主要原因。还有研究表明AHll蛋白可以和一种在新生 儿的发育及胞内运输中起重要作用的亨廷顿蛋白结合蛋白 1(Huntingtin．associated protein1．HAPl)蛋白形成稳定的复合物从而在脑部早期 发育中的起重要作用。但这些过程的具体分子机制并未阐明。人的Ahi一1基因编 域及一些潜在的SH3结合位点，有趣的是AHll蛋白的SH3结构域和很多经典的 SH3结构域如：Abl，Fyn,和Lck相比有很低的同一性，只有一些十分保守的氨基 酸残基相同。 得到AHll的三维结构能够方便对其功能的研究，也便于寻找与其相互作用 的新的配体。本文选择了涉及很多蛋白相互作用的SH3结构域作为研究对象。 为了深入的了解AHll蛋白SH3结构域的结构和功能，本实验克隆、表达、纯化 了AHll蛋白的SH3结构域，并对纯化后的蛋白作了初步的晶体学研究，也利用 了GST pull 进行了验证。通过NI柱和分子筛的两步纯化，我们得到了纯度大于95％的SH3 结构域，动态光散射分析表明，SH3在溶液中是以单体形式存在。通过坐滴气相 MAmmonium MSodiumacetate 扩散法在O．2 sulfate．0．1 trihydratepH4．6，30％ w／v ether Polyethyleneglycolmonomethyl2,000条件下得到可用于衍射的晶体。一 套分辨率至2．5 A的晶体衍射数据被收集并分析，结果表明AHll蛋白的SH3晶 a=fl--),=900，经计算，晶体的Vm为1．94A3Da1，晶体的溶剂含量约为36．69％， 一个晶体学不对称单位中含有一个SH3分子。GSTdown实验表明AHll的 pull 作用可能是通过其它结构域介导。 down 关键词：AHll蛋白HAPl蛋白SH3结构域表达纯化结晶Pull ABSTRACT ABSTRACT and AHI1 isacommon siteformurineleukemias helperprovimsintegration andshowntobe linkedtothe lymphomas closely e-myb have affect of and researchesshowedthatAHI1 call the leukemogen production inAHI1 areamain researchhas mutations causeofJoubert Syndrome(JS)．Recently alsoshowedthatAHllbinds to