发酵过程的参数相关分析.pptVIP

2.2 生物相关 菌体生长引起的生物相关特性 快速生长期时，培养液粘度上升，KLa下降，引起DO水平的变化 代谢引起的生物相关 通过生物细胞及代谢途径的不同所引起的活性变化,直接对控制对象特性发生影响。菌体细胞代谢活性变化而直接引起的某测定参数的变化，即为代谢特性参数相关。 ----代谢强度的变化 ----代谢途径的变化 ----引起的基质消耗或代谢产物形成的不同 代谢活性变化：环境条件的线性或动力学因素、细胞内某调节因子引起的代谢流迁移、基因水平的信息流。  生物相关：OUR与DO的基本相关特征 OUR DO rpm 加糖 DO和OUR之间的动力学特征 O2消耗与过程传递的物质平衡 时间(h) 生物相关：RQ 、CER 、DO 间的相关 RQ CER DO RQ RQ RQ CER DO DO DO Cglu Cglu 时间（h） 时间（h） 时间（h） 时间（h） 加碳源 加碳源 葡萄糖碳源加入,限制性基质情况 还原性大的碳源 好氧发酵 厌氧发酵 38小时DO下降，同时OUR上升RQ下降，CER变化不大，提示可能菌体利用了还原性更强的物质做碳源。77小时开始补糖后，CER,OUR同步上升，DO下降，RQ维持不变，提示此时碳源处于限制。 63 h, 补糖速率过快，DO下降、CER上升、RQ上升 多基质利用的参数相关变化 相关性分析：发酵过程中加油的作用 消泡 释放CO2 (h) EO2 ECO2 DO 作为碳源利用 (h) RQ OUR CER DO 改变流变特性 (h) OUR CER DO KLa 加糖 加油 作为氧载体 提高对氧亲和力 (h) 3. 发酵培养基分析 玉米浆 成分： 氨基酸 无机盐 磷酸盐的调节 1.磷促进初级代谢，菌体趋向于生长，胞内ATP浓度迅速增加，抑制次级代谢 2.磷酸盐浓度增加，抑制了6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活力，但促进了3-磷酸丙糖的氧化，结果使HMP途径受阻，而使糖代谢趋于酵解途经， HMP途径功能：NADPH（还原力） 3.磷酸盐限制抗生素合成途径中前体物质的生成，从而限制红霉素多酮体的缩合 红霉素生物合成过程中组分研究 目前市场上对EA的比例要求在78 %以上。 发酵初始添加六种氨基酸对产量与组分影响 添加Gly后对红霉素产量、组分时序变化 Fig.5.10 Effect of Gly on the component percent of erythromycin in the fermentation process (1# 0.05, 2#0.15%) 50L发酵罐考察Gly对红霉素发酵的影响 50L发酵罐考察Gly对红霉素组分影响 发酵工艺改进几点想法 1.控制前期菌体比生长速率 调整发酵氮源（硫铵、玉米浆、黄豆饼粉比例），后期菌浓维持 油与淀粉利用代谢流差异 MCM：甲基丙二酰CoA变位酶 S: 琥珀酰CoA (TCA循环） 2.后期代谢弱化问题， 措施：整体代谢途径考虑，根据代谢途径关键酶活性特点，复合微量元素强化 红霉素代谢曲线 65 h后, RQ基本不变，OUR、CER开始过早迅速下降 红霉素的生物合成途径 整体代谢流强化为核心 丙酰CoA与甲基丙二酰CoA的生物合成 OUR、CER下降： TCA循环相关酶系下降，红霉素合成代谢流减少 后期主要强化途径 1.HMP途径：还原力（NADPH）的提供 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性 2.TCA循环通量 3.红霉素合成途径 甲基丙二酰CoA变位酶 甲基化酶、羟基化酶 6-磷酸果糖激酶 柠檬酸合成酶（CS) 甲基丙二酰CoA羧基转移酶 谢 谢！ Thanks! 发酵过程的参数相关分析 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，国家生化工程技术研究中心 2007.5.23 主要内容 1.重要参数介绍 2.多参数相关性分析 3.发酵培养基分析与工艺改进 1.发酵过程的参数分类 直接参数 通过传感器把非电量变化直接转化为电量变 化，实时地送计算机数据采集。物理参数、化学参数、生物量参数就地测量（in line）、在线测量（on line） 间接参数: 由一些直接参数计算得到的各种反映过程 特性的参数。 反映菌体代谢活性、反应器工程特性、反应器操作特性…等。 手工参数: 取样后实验室手工测量参数，离线输入。 直接参数 物理参数 化学参数 成熟 不成熟 间接参数 反映菌体的代谢活性参数：OUR、CER、RQ 反映反应器工程特性