沙门菌属(Salmonella)是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和一知识讲稿.pptVIP

闽北职业技术学院食品与生物工程系 沙门氏菌检验 食品安全检验技术(微生物部分) 闽北职业技术学院食品与生物工程系 闽北职业技术学院食品与生物工程系 沙门菌属(Salmonella)是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌统称为沙门杆菌。 一、沙门氏菌生物学特性 闽北职业技术学院食品与生物工程系 形态、染色 G-杆菌 0.6-1.0um×2-4um 周身鞭毛,有菌毛。 形态大小 闽北职业技术学院食品与生物工程系 生化反应 不分解乳糖(亚利桑那菌除外),分解葡萄糖产酸产气(伤寒沙门菌产酸不产气)。 多数产生H2S,不产生靛基质,不液化明胶,不分解尿素,不产生乙酰甲基甲醇,多数能利用枸橼酸盐,能还原硝酸盐为亚硝酸盐,在氰化钾培养基上不生长。 闽北职业技术学院食品与生物工程系 前增菌:25克(加工食品)+225毫升缓冲蛋白胨 37度培养4小时(干蛋品18—24小时)。 增菌:移取10毫升接种于100mL的增菌液中。氯化镁孔雀绿(MM)或四硫酸钠煌绿(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸(SC)。 (一)前增菌和增菌 (二)分离培养 最适生长温度为35～37℃, 最适pH值为6.8～7.8。 选择性琼脂平板:BS培养基(亚硫酸铋琼脂)、DHL琼脂、HE(海克顿肠内琼脂培养基)或WS琼脂、SS琼脂。 闽北职业技术学院食品与生物工程系 选择 琼脂平板 沙门氏菌 Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ 沙门氏菌Ⅲ （即亚利桑那菌） 亚硫酸琼脂 (BS琼脂) 产硫化氢菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株不产生硫化氢，形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。 黑色有金属光泽 DHL琼脂 无色半透明，产硫化氢菌落中心带黑色或几乎全黑色。 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉红色，中心带黑色。 HE琼脂 WS琼脂 蓝绿色或蓝色，多数菌株产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色。 乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色；乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色，中心黑色或几乎全黑色。 SS琼脂 无色半透明，产硫化氢菌株有的菌落中心带黑色，但不如以上培养基明显. 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大肠艾希氏菌不能区分. 闽北职业技术学院食品与生物工程系 闽北职业技术学院食品与生物工程系 (三)五项生化试验 1、三糖铁琼脂试验 2、靛基质试验(吲哚试验) 3、尿素酶试验 4、氰化钾试验(KCN) 5、赖氨酸脱羧酶试验 闽北职业技术学院食品与生物工程系 1、三糖铁(TSI)试验 肠道杆菌科为革兰氏阴性菌,可发酵葡萄糖产酸。三糖铁琼脂试验是利用糖类发酵之不同与硫化氢产生与否,将肠道杆菌科各组细菌或各菌属加以区分。 三糖铁琼脂斜面培养基含有1﹪乳糖及蔗糖与0.1﹪葡萄糖作为发酵基质,且以酚红作为酸碱指示剂,如培养基由橘红转为黄色,表示有糖类发酵。测试时使用接种针先穿刺至底部,而后于斜面作划线接种,经培养18-24小时后,依情况判断糖类之发酵情形。 闽北职业技术学院食品与生物工程系 制好的培养基 对照管 斜面红色, 底面黄色 培养基全黄色 斜面、底部黄色,并产生H2S 斜面红色,底部黄色,产生H2S 底面黄色,并产生CO2 闽北职业技术学院食品与生物工程系 (1)斜面碱性(红色-)底部酸性(黄色+)产气或不产气(产气时会造成琼脂裂开):表示仅葡萄糖发酵。因微生物优先分解葡萄糖产酸,使培养基变黄,但因葡萄糖含量低,于斜面产生之微量酸立即氧化而呈碱性反应,同时培养基中的蛋白质也随之利用而产碱,培养基底部则因氧张力较小,且微生物生长较慢,故仍维持酸性反应。 (2)斜面酸性(黄色+)底部酸性(黄色+)产气或不产气:表示除了葡萄糖发酵外,乳糖与(或)蔗糖也发酵。由于乳糖与蔗糖浓度高,经继续发酵,可维持培养基斜面与底部保持酸性反应。 闽北职业技术学院食品与生物工程系 (3)斜面碱性(红色-)底部碱性(红色-)或无变化(橘红色):表示无糖类发酵。而蛋白质则于有氧或厌氧条件下进行代谢产生氨,而使培养基呈碱性反应,如有氧与厌氧均发生蛋白质分解,则斜面与底部均呈碱性反应。 为使结果准确,应于接种培养18-24小时内观察结果,以确保糖类尚未用尽,且蛋白质分解之碱性终产物尚未产生。 闽北职业技术学院食品与生物工程系 培养基变黑 (4)三糖铁琼脂培养基中亦含有硫代硫酸钠作为产生硫化氢之基质,且含硫酸亚铁作为检测此无色产物之指示剂,经接种培养后,若微生物有硫化氢产生,会与亚铁离子作用生成不溶性硫化亚铁之沉淀,进而使培养基变黑。 闽北职业