结核诊断产品培训幻灯片课件.pptVIP

C液 噬菌体冻干粉（Actiphage） 敏感细胞冻干粉（Sensor cells） 无菌净化水 杀病毒剂 （Virusol） 5ml 11ml 1.1ml 2-8°C下可保存7天 试剂准备 质控制备 每次试验均应设立阴性对照、阳性对照 阴性对照 阴性对照检测杀病毒剂Virusol 的有效性 设置方法：C液 阳性对照 阳性对照检测噬菌体 Actiphage 和敏感细胞 Sensor cells 的有效性 设置方法：敏感细胞用C液稀释106倍 E液 阳性对照 各加10 ml C液 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 1 ml C液 阴性对照 1 ml 三、标本要求及前处理(痰液) 标本要求 标本应为未进行抗结核治疗的初诊疑似患者标本 痰处理的必要性 去污染：抑制某些污染细菌，以防止其在平板上过度生长 痰液液化：使标本更易于操作，释放TB杆菌，并使TB杆菌 更易为特异性噬菌体感染 浓缩MTB细胞 去除痰液中某些抑制因子 痰液处理方法 (NALC-NaOH) 室温下用NALC-NaOH 处理 痰液15 min 磷酸缓冲液加至45ml中和 4000 rpm 离心 15 min 弃去上清液 用C液15 ml 洗涤 4000 rpm 离心 15 mins 弃去上清液 用 C液 1 ml 重悬 NALC-NaOH 溶液 室温静置 15 min 加等体积 NALC-NaOH 溶液 旋紧盖子后漩涡振荡 15 s 将痰液从痰瓶中转移至离心管中 痰标本消化方法 磷酸缓冲液 加磷酸缓冲液至体积为 45ml 4000rpm 离心 15 分钟 弃去上清液 加 15ml C液 C液 请勿让标本在磷酸缓冲液中停留过长时间 弃去上清液 4000 rpm离心 15分钟 C液 1ml 转移至反应管中 用 1ml C 液悬浮 0.1ml D液 四、检测过程 1、分别加0.1ml 试剂D溶液于阳性对照、阴性对照及标本中，轻轻摇晃，确保试管内容物位于试管底部，37℃孵育60分钟。 痰处理 0.1ml D液 37℃孵育 60min 0.1ml D液 0.1ml F液 2、分别加0.1ml试剂F溶液于阳性对照、阴性对照及标本中，充分混匀（确保杀病毒剂与反应管内壁完全接触），置于室温5-7分钟（严格控制时间）。 室温5分钟 3、分别加5 ml C液于阳性对照、阴性对照及标本中，颠倒混匀一次。 4、分别加1 ml 试剂E溶液于阳性对照、阴性对照及标本中。 5ml C 液 1 ml E 液 5、将标本、阳性对照，阴性对照分别倒入相应的培养皿。 6、立即将冷却至55±2℃的试剂G 5ml 于培养皿中，快速混匀。 置于室温定型。 7、倒置于37℃培养箱中培养，18－24小时判读结果。 结果判定标准 FASTplaqueTBTM检测质控（对照），噬菌斑数应在如下范围 阳性对照 ≥20 个噬菌斑 阴性对照 ≤10个噬菌斑 FASTplaqueTBTM检测临床标本，噬菌斑数应在如下范围： 阳性结果 ≥50个噬菌斑 阴性结果 ≤19个噬菌斑 可疑结果 20-50个噬菌斑 阴性： 无噬菌斑 阳性： 可数噬菌斑 阳性： 噬菌斑部分融合 阳性： 噬菌斑完全融合 评 价 一、技术评价 二、临床评价 一、技术评价 灵敏性 - 可以检出低浓度的 MTB 标本MTB浓度≥100－300cfu/ml即可检出 特异性 - 只检测活的 MTB 噬菌体法仅对结核分枝杆菌复合群敏感，对其它非结核分枝杆菌、非分枝杆菌均不敏感。 快速 - 48h内出结果 简便 - 不需任何特殊仪器 二、临床评价 国内临床评价 1、中国CDC结核防治中心 2、解放军三O九医院 3、上海市肺科医院 4、无锡市传染病医院 （资料来源：中国CDC结核病防治临床中心） 各方法检测结核分枝杆菌结果比较 几种方法检测结核分枝杆菌结果比较（检测例数均为120例） （资料来源：解放军三O九医院结核中心） FASTPlque TB法检测结核分枝杆菌结果 FASTPlaqueTB法检测结核分枝杆菌结果 FPTB法与BACTEC-460法检测结核分枝杆菌结果比较 （资料来源：上海市肺科医院） 几种方法检测结核分枝杆菌的结果比较 （资料来源：无锡市传染病医院） 结论 1、FASTPlaque法比涂片法和LJ培养法检出率更高； 2、FASTPlaque法与BACTEC-960、 BACTEC-460法检出率无明显差别； 3、FASTPlaque法比LJ培养法和BACTE