夏奶奶 酵母核糖核酸的提取及测定 (破解版 可复制编辑).pdfVIP

实验三 酵母核糖核酸的提取及测定 一、目的 了解从酵母中提制 RNA 的方法并掌握其测定手段。 二、原理 微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中以酵母最为理想，这是因为酵母核酸中主要 是 RNA (2.67~10.0%), DNA 很少  (0.03~0.516%), 菌体容易收集, RNA 也易于分离。此外， 抽提后的菌体蛋白质 （占干菌体的 50%）还具有很高的利用价值。  RNA 提制过程是先使 RNA 从细胞中释放, 并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去，再 根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将 pH 调到 2.0~2.5 使 RNA 沉淀，进行离心收集。 提取 RNA 的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱性和浓盐法，前者利用碱使细菌细 胞壁溶解，使 RNA 释放出来，这种方法抽提时间短，但 RNA 在此条件下不稳定，容易分 解；后者是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞腹的通透性，使 RNA 释放出来，此法 易掌握，产品颜色较好，用浓盐法提取 RNA 时应注意掌握温度，避免在 20~70℃之间仪时 间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使 RNA 因降解而降低 提取率，利用加热，至 90~100℃使蛋白质变性，破