拟除虫菊酯降解基因的克隆.pdfVIP

摘 要 菌，通过同尾内切酶肘。6I和BamHI酶切，成功构建了]XCC2D菌株的基因组质粒文库。文库的库 容约为lo．、插入片段长度约为2～Tkb。 利用农药-Burk培养基和酯酶筛选培养基对所构建的基硐组质粒文库进行筛选，选取在农药平 板中生长、在酯酶筛选平板上形成透明圈的重组菌株。对筛选得到的重组菌株2—4-38进行了酯酶 比活力测定和农药降解能力检测，实验结果表明：该重组菌株具酯酶活性，其比活力为0．535， 并为胞外分泌型酶。该重组菌株作用高效氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯108h后，降解率 分别为66．O％、50．5％、95．7％；作用丙溴磷和哒螨灵72h后，降解率分别为32．5％和25．9％。 对2一铲38重组菌株中插入的大小约为3．2ida的外源片段进行亚克隆，并对亚克隆片段进行核 苷酸序列测定、拼接，得到长为1854bp，具完整阅读框架，编码617个氨基酸的基因序列。该序 根据文库实验中获得的lipase基因序列设计引物，经PCR可扩增出完整的Hpa∞基因序列，整个实 肪酶基因，该基因序列已在C,enaank注册(注册号为DQ906143)。 现有文献表明脂肪酶基因功能中未见有降解农药的报道，本实验首次克隆到了具有广谱农药 降解活性的脂肪酶基因。 关键词不动杆菌／XCC2D，拟除虫菊酯，基因组文库，重组菌株，脂肪酶，降解 Abstract The Call Acinetobacter andother sp．JXCC2Ddegradesynth荫c pesticide pyrethroid pesticides ofthebacteriawas and constructed theE．coli efficientlybroadly．Theganomiclibrary successfully,with JMl strain．and vP∞tOl．Bothstl2tmandthat 10∞the thevector receptor pGEM一3Z勰the containing could the whichw∞testedinthis the Acinetobacter hardlydegradepesticides paper．Partlydigested DNA，withMobI，intothe between3kband sp．JXCC2Dgenomic fra舢ts 7kb．Completelydigested as the thelinearthevector．Thetworestriction pGEM-3Z,andpurif似l andhavethe terminal．Wethe insert sa鹏coherent withthe 2-7kb． got genomiclibrary fragmentsamong andthe was104． capacity was