拟南芥、荠菜心皮发育相关基因CRABS CLAW cDNA克隆及交互转化.pdfVIP

中文摘要中又摘要 拟南芥翻rabidopsisthaliana)和荠菜(Capsellabursa—pastorisL)是同为十。产 花科而不同属的草本植物，二者遗传背景、生理特性和生长分布都具有较高的|ld 源性和相似性。但二者的心皮形态具有十分明显的差异，拟南芥为二心皮长角彤 形态而荠菜为二心皮心形结构。作为模式生物，拟南芥心皮发育相关基因己得以 克隆，拟南芥心皮发育主要受CRABS 的控制，二者都属于MADSbox基因家族成员。尤其是CRC可抑制正在发育雌麓 的横向生长，促进其轴向生长。为了揭示CRC基因在心皮形态差异显著的两种植 物中的差异性，本研究选取拟南芥和荠菜为材料，根据已报道的拟南芥心皮发育 相关基因CRABS 并进行序列比对及同源性分析，同时采用转基因技术，将拟南芥CRC基因和克隆 的荠菜CRC同源基因cDNA交互转化，获得了转基因拟南芥和荠菜。并对转基阔 植物开展了相关形态学观察及分子鉴定。取得了以下结果： 1、克隆拟南芥、荠菜CRABSCLAW(CRC)基因cDNA； 根据GenBank收录的拟南芥CRABSCLAW基因的cDNA序列设计引物， 通过RT-PCR的方法，分别从哥伦比亚型拟南芥总RNA、野生型荠菜总RNA中 扩增出CRABSCLAW基因的全长cDNA序列，测序证明拟南芥CRC序列与 达到93％左右的同源性。该基因已登录到GenBank，登录号：DQll9055。 2、构建了拟南芥和荠菜CRC基因cDNA植物表达载体； eDNA 以弧质粒载体pWMl01为基础，分别将已克隆的拟南芥和荠莱CRC 重组，构建了由组成型启动子CaMV35S调控的CRC基因的植物表达载体，片 命名为pWM—atCRC、pWM—cbCRC。 3、拟南芥、荠菜CRABSCLAW(CRC)基因的交互遗传转化； 以根癌农杆菌浸渍法、滴泣花器、与愈伤共培等方法交}i转化拟南芥和荠菜， 筛选到转拟南芥CRC基困的荠菜植株和转荠菜CRC基因拟南芥植株。外部形念 学观察及分子检测表明：拟南芥CRC基因和荠菜CRC基斟已整合进荠菜基[大J组 和拟南芥基因组中，二者在对应植株中的组成型表达对各fI的心皮形态和大小鄢 产生了一定影响，在拟南芹、荠菜变异株中心皮有的表现…加强的轴向增长，仃 的则呈现宽而短的结构，心皮发面出现凹凸不平等现象。 4、比较了采川村{癌农杆菌对拟南芥和荠集的几种转化方法。 为了提高农柯菌的转化效率，摸索较1t的转化途径，本研究对几种转化方法 进行比较。结果表f归：滴注花器法及浸渍植株法针对性强，对植株伤害小，后期 恢复生长快，操作简便易行，转化效率有所提高。而叶盘与愈伤组织共堵法，由 于拟南芥、荠菜等叶片较小而薄，经农杆菌感染又经过抑菌筛选等步骤后难以恢 复生长，愈伤共培后，生长缓慢，分化率低，后代筛选难度大。因此，在拟南芥、 荠菜等小型植株的转化方法上，滴注法或浸渍法较好。 关键词：拟南芥；荠菜；CRABS CLAW(CRc)基因；cDNA克隆；遗传转化 ¨ Abstract and Arabidopsis0rabidopsisthaliana) Shepherdkspurse(Capsel肠 all in L、aretheweedsCruciferae family．Theirbackground bursa-pastoris genetic an the and traitsshare butwith identicalthat biological hi曲homologous