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第三章血液分析仪检验南通大学第二附属医院检验医学中心陆永辉 血液分析仪发展史（一） 血液分析仪（hematology analyzer, HA）： 临床血液一般检查最常用仪器。 ?1947年，美国人库尔特（W.H.Coulter）发明电阻抗法粒子计数专利技术， 1953年库尔特家族研制出全世界第一台血细胞计数仪：Model A，至90年代发展为可计数分类的全自动血液分析仪。 血液分析仪发展史（二） 从单成分计数到组合计数分类 从单通道到多通道 从半自动到全自动 从白细胞二分类到三分类发展为五分类 形成红细胞、白细胞、血小板、网织红细胞四类参数系列 融合物理、化学检测方法 血液分析仪的发展 检测自动化 技术多样化 分析智能化 参数系列化 使用普及化 第一节 血液分析仪检测原理 一、仪器基本结构 （一）机械系统 （二）电学系统 （三）光学系统 检测方法：电阻抗法、光散射法 二、电阻抗法血细胞分析技术 （一）电阻抗原理(principle of electrical impedance)，又称库尔特原理（Coulter principle） 库尔特原理 “当一个不良导体颗 粒，例如血细 胞，通过两个电极之间 时 ，导 致电 路的电 阻抗发生变化，产生脉冲电信号。” 脉冲次数—细胞数量，脉冲大小—细胞体积。 电阻抗原理示意图 红细胞通过小孔 白细胞通过小孔 电阻抗原理 血细胞相对非导电，悬浮在电解质溶液中受负压吸引通过计数小孔时，引起电阻瞬间变化产生脉冲信号，脉冲振幅代表细胞体积，脉冲数量即细胞个数。 用于红细胞、白细胞、血小板计数和体积测定 （二）电阻抗法白细胞检测原理 35-450fl范围内分析白细胞（计数和 体积三分类） （三）电阻抗法红细胞检测原理 红细胞计数和血细胞比容测定 36-360fl范围内计数红细胞 （四）电阻抗法血小板检测原理 血小板计数：2-20fl范围计数为血小板 因体积较小，可与红细胞在一个系统中进行检测。 直方图在2～30fl（不同仪器范围有差异）。 血小板平均体积（mean platelet volume, MPV）。 细胞计数的几点说明 适宜的孔径：RBC宝石微孔直径80μm，WBC微孔直径100μm 适度的稀释：抗凝全血经1：500稀释计数WBC，1：50000稀释计数RBC、PLT 加入溶血剂（溶解RBC，转换血红蛋白）,打气泡混匀后计数WBC，Hb比色 RBC（36-360fl）与PLT（2-20fl）体积差异大，容易区别，可在同一计数池内同时计数 RBC:WBC100:1，故WBC对RBC计数影响忽略。 （二）白细胞分类计数原理 仪器将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道（channel）。 每个通道：1.64fl。 根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图（Histogram）。 　三分类原理： 白细胞经溶血素处理，胞质渗出，细胞皱缩，胞膜紧裹核与颗粒，体积发生变化 第一群（35～90fl）小细胞区：淋巴细胞（体积最小，一般在35～90fl）。 第二群（90～160fl）是单个核细胞区（中间细胞）：包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等 第三群（160fl）大细胞区：嗜中性粒细胞（体积最大，一般在135-350fl）。 白细胞体积 生理状态下：单核细胞嗜酸细胞中性粒细胞嗜碱细胞淋巴细胞 溶血素处理后：中性粒细胞嗜酸细胞单核细胞嗜碱细胞淋巴细胞 三分群血液分析仪正常白细胞分类模式图（直方图） 从三分群到五分类 三分群： 淋巴细胞 单个核细胞 中性粒细胞 五分类： 淋巴细胞 单核细胞 中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞 检测原理： 组合应用 ☆电学 ☆光学 ☆细胞化学等 三、光散射法血细胞分析方法 1、容量、电导、光散射（VCS）测量法 2、电阻抗与射频技术联合检测法 3、光散射与细胞化学技术联合检测法 4、多角度偏振光散射检测法 （一）容量、电导、光散射（VCS）测量法 五分类VCS技术 运用V、C、S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。 V-低频波，分析细胞体积； C-高频波，分析细胞核型； S-激光，分析细胞的颗粒特性。 采用三个截然不同的方法，逐个、同时地分析每一个白细胞的特性，即体积、内部结构、颗粒特性和膜表面特征，对每个细胞的三项检测值作综合分析，定义出亚群类型