聚β羟基丁酸酯解聚酶发酵及酶性质研究.pdfVIP

摘 要 聚B一基丁酸酯(p髓)为微生物在不平衡生长条件下于细胞内合成的一类 贮藏性聚酯，广泛存在于自然界原核生物中。因其不仅具有与化学合成高分子相 似的性质，而且，其良好的生物相容性、生物降解性、光学活性和压电性等独特 的性质使得PHB可以作为包装材料、光学材料和医用材料等取代通用的塑料而 得到多方面的应用。 本实验是在对PHB解聚酶降解行为充分研究的基础上，优化发酵生产和分 (PHB)解聚酶进行提纯，并对其酶学性质及蛋白质学性质进行了初步研究。主 要实验结果如下： 养和发酵罐发酵生产胞外PHB解聚酶。产酶高峰分别出现在96h和72h。对发 酵液按以下流程进行分离纯化：发酵液处理…超滤浓缩(截留分子量 sepharosecL一6B凝胶色谱。经检测纯化后的P船解聚酶，纯化倍数为59．1， 总酶活回收率为20％。 2、酶蛋白基本性质：采用高效液相色谱对酶蛋白单一性进行检测，结果显 示样品纯度较好；sDs一聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为单一谱带，依据PHB解聚 酶的Rm求得其分子量为18000Da；采用连续聚丙烯酰胺等电聚焦电泳等电点 巯基乙醇使酶活损失较大，H202，尿素对酶活抑制不明显。 见氨基酸，其中天冬氨酸和谷氨酸含量较高，其侧链基团可能在底物结合或酶的