粗毛栓菌木聚糖酶的分离纯化及性质研究.pdfVIP

粗毛栓菌木聚糖酶的分离纯化及性质研究 专业 生物化学与分子生物学 硕士研究生范美霞 指导教师 陶宗娅教授 孙迅教授 摘要：木聚糖是植物半纤维素的主要组分，约占植物总糖的三分之一，是 自然界中除纤维素以外含量最丰富的再生生物质资源。木聚糖酶(xylanases) 指专一降解木聚糖为寡木聚糖、低聚木糖、木二糖和木糖的一组酶的总称，它 们广泛存在于真核和原核生物中。木聚糖酶在造纸、食品、饲料和医药等工业 中具有广阔的应用前景。粗毛栓菌TrametesFr．是一种白腐担子菌，在 gallica 我国分布广泛，是杨木的一种主要生物降解者。已有研究表明，该菌具有较强 降解木质纤维素的能力。本论文以粗毛栓菌为出发菌，对该菌在麦草粉基质上 所产生的三种木聚糖酶进行了分离纯化和酶学性质的研究。 将粗毛栓菌在麦草粉固态基质上培养40d，用去离子水浸提培养物得浸提 液，再经超滤浓缩、硫酸铵盐析、PhenylSepharose fast G．150分子筛层析等分离与纯化步骤，获 flow阴离子交换层析和Sephadex 得部分纯化的木聚糖酶，其回收率和纯化倍数分别为1．45％和15．6。部分纯化 的木聚糖酶再经活性．聚丙烯酰胺凝胶电泳(活性一PAGE)回收，获得三种 SDS．PAGE电泳纯级的木聚糖酶同工酶组分，即XI、XII和XIII(按等电点 从大Nd,排N)。 对纯化出的三种木聚糖酶同工酶组分进行了酶学性质研究，结果如下：用 10．25％、X110．63％ 分别为5．6、4．7和4．0；苯酚一硫酸法测其含糖量依次为X 和XⅢ3．4％。双功能性分析表明，XI既能降解木聚糖，又能降解纤维素。同 II的 其有激活作用，Mn2+和C02+有抑制作用；以桦木木聚糖为底物，测得x ‰值为0．75mg／mL，％碹x为5000mmoL／(min．mg)。 关键词：粗毛栓菌 木聚糖酶 固态发酵 分离与纯化 酶学性质 Purificationandcharacterizationof from xylanases thewhite—rot Trametes fungus gallica andmolecular Major：Biochemistrybiology Graduate：Fan Mei—xiaTutor：Prof．TaoSunXun Zong-ya Abstract isthemain Xylan important of componentplant accountsforonethirdof thetotal in to isthe sugarplants．Next cellulose，xylan most abundant biomass can into