植物生殖工程座谈讲座.pptVIP

二、分离方法 1 、 酶解涂抹法：用果胶酶处理雀稗属(Paspalum)的几个种的子房，使子房壁离解疏松，然后挑出离解的子房置于玻片上进行涂抹，观察到成熟胚囊的基本结构。 2、酶解振荡法 ：将固定或活体的胚珠置于含有纤维素酶、果胶酶或蜗牛酶及一定渗透稳定剂、膜稳定剂的酶液中，在小型振荡器上保温(28--30℃)连续振荡酶解，使珠被组织离散，再经过离心分离、清洗纯化，获得较清净的胚囊类细胞，最后进行显微观察和细胞学研究。 3 、酶解压片分离法 ①获得无菌胚珠 ②酶解：将生活胚珠放入酶液中28℃黑暗条件下处理3．5-4h. ③清洗：用0.6mol／L甘露醇洗净酶液 ④压片：滴一滴含有酶解后胚珠的液体于载玻片上，加上盖玻片。 ⑤观察：制好的压片用石蜡封边后在相差显微镜下观察。 。④压片：滴一滴含有酶解后胚珠的液 三、问题 ①胚囊壁及胚囊周围组织的结构特异性。 ②酶类的应用：木质化或栓质化的组织，采用目前应用的酶类去分离则比较困难。 ③胚囊数少 第五节 植物性细胞原生质体 的分离、培养和融合 与体细胞相比，性细胞具有其独自的特色：第一，它们具单倍性基因组，遗传组成单一。第二，它们经历两性分化与一系列的发育程序，产生形态与生理各异的多种细胞类型。第三，它们适应于有性生殖，能通过传粉受精，繁殖种子与后代。 一、原生质体分离 1、花粉原生质体的分离 花粉具有结构简单、单倍体遗传组成、发育同步、数量众多、参与传粉受精作用等特点。 三条技术路线： 化学药品降解花粉壁 非酶脱壁 酶解法 一步酶解法 花粉置于酶液中，通过水合膨胀，使外壁沿萌发沟裂开，内壁大面积地暴露在酶的作用之下而分解，释放出原生质体。 水合-酶解二步法 第一步，花粉在蔗糖液内充分水合，使外壁裂开。 第二步，转入酶液，降解内壁，获得原生质体。 甘蓝型油菜与紫菜苔、凌霄花 萌发-酶解二步法 第一步是将成熟花粉置于花粉萌发培养基中，待花粉大量萌发，长出短花粉管，及时转入第二步，在酶液中酶解。 由于花粉管尖端的壁为果胶质与纤维素所组成，酶液由此处开始降解花粉管壁，再扩展至降解花粉内壁，从而释放出原生质体。烟草。 影响分离效果的因素 (1) 植物种类 (2) 花粉发育时期 (3) 酶的种类 (4) 酶液渗透压 (5) 新鲜与保存花粉 2、生殖细胞与精细胞的分离 细胞核大，细胞质与细胞器稀少，核质比很高。类似天然的单倍性的核质体，在植物性细胞工程中有特殊作用。 生殖细胞的分离 (1) 一步渗透压冲击法 花粉置于低渗蔗糖溶液中保温一段时间后，花粉自行破裂，生殖细胞随营养细胞质流出。棉花 (2) 二步渗透压冲击法 花粉置于等渗蔗糖溶液中培养，当大部分花粉开始萌发时，加入蒸馏水使渗透压骤降，导致花粉破裂释放生殖细胞。 石蒜、风雨花、玉帘、烟草、凤仙花、蚕豆 (3) 低酶法 花粉在低浓度酶 (一般为0．1％纤维素酶与0．1％果胶酶)与低渗蔗糖溶液中保温，促使花粉破裂释放生殖细胞。 黄花菜、韭菜、朱顶红、唐菖蒲、鸢尾 (4) 花粉原生质体释放法 首先分离出花粉原生质体，然后用渗透压冲击法或机械法，使花粉原生质体破裂，获得生殖细胞。 鸢尾、唐菖蒲、朱顶红、风雨花等。 精细胞的分离 三细胞花粉 二细胞花粉 (1) 三细胞花粉的精细胞分离方法 研磨法：用玻璃匀浆器轻轻研磨花粉悬浮液，使花粉壁破碎，释放出精细胞。 甘蓝型油菜、甘蓝、紫菜苔、非洲菊、菠菜 渗透压冲击法：将花粉置于低渗溶液中，使花粉自行破裂。白花丹、玉米、小麦、甜菜 植物生殖工程 第一节 概 述 一、植物生殖工程概念 植物生殖工程：是通过控制和利用植物有性生殖过程而改良植物的应用技术领域，主要指在离体条件下以生殖细胞和原生质体为对象所进行的遗传操作，包括整个有性生殖过程的控制和利用。 与体细胞工程比优点： ①有性生殖是大多数植物的自然生殖过程，是一种阻力较少的途径。 ②生殖过程中提供了许多基因操作的机会．如花粉管是引导雄配子完成受精作用的运载工具，具有作为外源基因载体的功能。 ③植物生殖系统中拥有许多天然的单倍体细胞，可以直接制备单倍体原生质体。 ④生殖系统中丰富多样的细胞类型可用于不同研究途。 ⑤单倍性的生殖细胞经过减数分裂发生了各种形式的遗传重组，具有极大的遗传变异性，因此通过生殖工程操作可以直接获得各种类型的新个体。 植物生殖工程包括 二大生殖系统：雄性生殖系统和雌性生殖系统 两种操作方式；活体操作和离体操作； 三个研究水平：即器官、细胞和原生质体水平。 D、