离心机对植物组织蛋白质的提取植物组织蛋白质提取方法.pdfVIP

离心机对植物组织蛋白质的提取 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入 3.5ml 提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液 放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。 3、用离心机离心 8000rpm，40min，4℃或 11000，rpm，20min，4℃。 4、提取上清夜，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮 6g 这种方法针对 SDS，垂直板电泳！ 二、植物组织蛋白质提取方法 (summer) 三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积 3 倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心 (4℃8000rpm 以上 1 小 时)弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮(含 0.07%的 β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm 以上 1 小时)，然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置 30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心 (15℃8000rpm 以上 1 小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在 4℃待用。 5、用Brandford 法定量蛋白，然后可分装放入-8