细胞工程第九章节动物细胞培养的基本知识与技术(692KB).pptVIP

（三）原代细胞的培养方法 1．组织块培养法 第九章 动物细胞培养的基本知识与技术 2．消化培养法 第九章 动物细胞培养的基本知识与技术 3．悬浮细胞培养法 第九章 动物细胞培养的基本知识与技术 三、细胞传代方法 根据细胞生长的恃点，传代方法有3种。 1悬浮生长细胞传代 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／2一2／3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。 第九章 动物细胞培养的基本知识与技术 2 半悬浮生长细胞传代 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹 打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 3贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。 第九章 动物细胞培养的基本知识与技术 贴壁生长细胞传代方法： 1 吸光培养瓶中的培养液 2 加入1-2 ml 0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准） 静置2-10 min（显微镜下动态监测）。 3 吸去胰蛋白酶液，加入培养液。 4 用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。 5 吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于新的培养瓶内。 6 加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。 7 将后者放入培养箱中培养。 第九章 动物