纳豆芽孢杆菌狉狅犮犌基因和狌狉豺基因敲除载体的构建.pdf

第 卷第 期 上 海交 通 大 学 学报 （农 业 科 学版） Ｖｏｌ．３１Ｎｏ．５ ３１ ５ 年 月 （ ） 　Ｏｃｔ．２０１３ ２０１３ １０ ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＨＡＮＧＨＡＩＪＩＡＯＴＯＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥ 文章编号： （ ） ： ／ １６７１９９６４２０１３０５００１６０４ 犇犗犐１０．３９６９Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７１９９６４．２０１３．０５．００４ 　 纳豆芽孢杆菌狉狅犮犌基因和狌狉犲基因敲除载体的构建 黄 蓓，吴旭蕾，钱炳俊，张建华 　 （上海交通大学 农业与生物学院，上海 ２００２４０） 摘 要： 基因和 基因分别编码纳豆芽孢杆菌中 个与产氨相关的酶———谷氨酸脱氢酶编 狉狅犮犌 狌狉犲 ２ 　 码和尿素酶。为构建这 个基因的敲除载体，通过 分别获得了 个靶基因的上下游旁邻片段 ２ ＰＣＲ ２ 和抗性筛选基因 。将上游旁邻片段、 和下游旁邻片段按次序克隆到革兰氏阳性菌基因组 狀犻狊犐 狀犻狊犐 整合质粒ｐＭＵＴＩＮ４中。限制性内切酶酶切图谱分析及测序结果显示成功构建了纳豆芽孢杆菌 基因和 基因的敲除载体 ：： 和 ：： 。该质粒的构建， 狉狅犮犌 狌狉犲 ＭＵＴＩＮ４狉狅犮犌 狀犻狊犐 ＭＵＴＩＮ４狌狉犲 狀犻狊犐 ｐ ｐ 为同源重组获得低产氨纳豆芽孢杆菌工程菌株奠定了基础。 关键词：纳豆芽孢杆菌； ； ；基因敲除载体 狉狅犮犌 狌狉犲 中图分类号：ＴＳ２０１．３ 文献标识码：Ａ 　　　　 ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＫｎｏｃｋＯｕｔＶｅｃｔｏｒｓｆｏｒ狉狅犮犌Ｇｅｎｅａｎｄ狌狉犲 Ｇｅｎｅｉｎ犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊Ｎａｔｔｏ ， ， ， 犎犝犃犖犌犅犲犻犠犝犡狌犾犲犻犙犐犃犖犅犻狀狌狀 犣犎犃犖犌犑犻犪狀犺狌犪 犼 （ ， ， ） ＳｃｈｏｏｌｏｆＡｒｉｃａｌｔｕｒｅａｎｄＢｉｏｌｏ ＳｈａｎｈａｉＪｉａｏｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｓｈａｎｈａｉ２００２４０Ｃｈｉｎａ ｇ ｇｙ ｇ ｇ ｙ ｇ ： （ ） ， Ａｂｓｔｒａｃｔ狉狅犮犌 ｅｎｅａｎｄ狌狉犲ｅｎｅｃｏｄｅｌｕｔａｍａｔｅｄｅｈｄｒｏｅｎａｓｅＧＤＨ ａｎｄｕｒｏｋｉｎａｓｅｉｎ犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊ｎａｔｔｏ ｇ ｇ ｇ ｙ ｇ ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．Ｂｏｔｈｏｆｔｈｅｅｎｚｍｅｓｌａｋｅｒｏｌｅｓｉｎａｍｍｏｎｉａｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｋｎｏｃｋｏ