lnrcutelncrna荧光定量检测试剂盒sybrgreen-天根生化.pdf

lnRcute lncRNA荧光定量 检测试剂盒(SYBR Green) (FP402) 操作指南 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. cDNA 样本 2. 移液器及配套枪头（RNase-free ） 3. 1.5 ml 离心管（RNase-free ），200 μl PCR管（RNase-free ） 4. 涡旋振荡器，台式离心机，金属浴/ PCR仪 Step 1 融解2 ×lnR lncRNA Premix (如果保存在-20℃)，ROX Reference Dye，模板，引物和 RNase-Free ddH O，并将所有试剂在室温下溶解并彻底混匀。 2 使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。 Step 2 在冰上进行Real Time PCR反应液的配制 组成成分 50 μl 体系 25 μl 体系 20 μl 体系 终浓度 2 ×lnR lncRNA 25 μl 12.5 μl 10 μl 1× Premix 正向引物(10 μM) 1.25 μl 0.625 μl 0.5 μl 0.25 μM 反向引物(10 μM) 1.25 μl 0.625 μl 0.5 μl 0.25 μM cDNA模板 － － － -ng-pg 50 ×ROX － － － － Reference Dye RNase-free 至50 μl 至25 μl 至20 μl － ddH O 2 Tips 1. 配制定量混合液时，应首先确定所需的反应数量，然后在反应数量的基础上增加10%-20% ，计算体系 配制数量。例如，一共需要做5个定量反应时，则体系配制数量至少为6 ；一共需要做10个定量反应时， 则体系配制数量至少为11；一共需要做20个定量反应时，体系配制数量至少为22。以此类推。 2. 按配制数量，先计算除cDNA模板和水之外的组分所需的用量，在冰上将所有组分共同配制到同一管中 制成混合物，彻底混匀，短暂离心。 3. 计算每个样本所需加入的cDNA模板的体积和所需补充的ddH O的体积。如果每个样本所需的ddH O体 2 2 积都相同，可计算总体所需的ddH O体积并加入到混合物中，彻底混匀。 2 1个20 μl体系 6个20 μl体系 11个20 μl体系 22个20 μl体系 试剂 使用量 使用量 使用量 使用量 2 ×lnR lncRNA Premix 10 μl 60 μl