标记抗体复合物的放射性.ppt

体外分析;【目的要求】 了解体外分析技术的定义、种类、发展和共同特点。 了解放射免疫分析技术的发展； 掌握放射免疫分析的原理、未知样品的测量。 了解放射免疫分析技术的试剂要求；掌握放免技术的分类方法。 了解放免分析质量控制的分类、目的；质量控制的指标及意义。 了解免疫放射分析的原理；掌握免疫放射分析的方法及与放射免疫分析的异同；了解免疫放射分析的特点 【教学内容】 体外分析技术 定义、分类、发展和共同特点。 放射免疫分析 建立和发展；在临床中的地位 原理：标准曲线、未知样品的测量 各试剂的要求和配制；分离方法的要求、种类 放射免疫分析的质量控制：目的、分类、指标和意义 免疫放射分析 原理、方法 与放射免疫分析法的异同 免疫放射分析的特点及临床应用;定义;放射分析方法或其派生的相关技术。 在体外进行机体内物质种类和含量的分析测定。 测定对象是患者血清或其他体液样品内的激素、其它生物活性物质和药物浓度等。;发展;商品化试剂盒的应用。 多种体外分析技术的互相渗透。例如将酶免疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合，建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分析，可极大地提高灵敏度，增大检测范围。 检测自动化。 实现多个待测物同时检测，如时间分辨荧光免疫分析。;使体外分析技术在临床和基础医学研究上应用极为广泛。 如内分泌学、肿瘤学、免疫学、病毒学、药理学、血液学、消化病学、神经病学、妇产科学等被推广应用，有力地推动了医学科学的发展。;体外分析技术建立的基础:;生物学基础：特异性结合反应 ;方法学基础：结合反应动力学规律;定量手段 (标记配体作为示踪剂);发展;近年来的主要优势包括多种技术的互相渗透，自动化程度的提高等。例如将酶免疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合，建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分析，可极大地提高灵敏度，增大检测范围。 在时间分辨荧光免疫分析( TRFIA)等分析法中应用新技术实现多个待测物同时检测。;体外分析技术;放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA;放射免疫分析法是Yalow和Berson于1960???在研究胰岛素的时候创立的一种体外放射分析技术。 结合了放射性核素的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。;一、RIA的基本原理;基本原理;Ag;（二）剂量反应曲线：标准曲线;标准曲线的绘制方法;;B%;未知样品的测量;Ag;B%;在实际的操作中，一般要设立： 最大结合管（Bo）：标准抗原的量为0，只有标记抗原和特异性抗体时，标记抗原与抗体充分反应后分离B和F，所测得的B的放射性为Bo。这是没有标准抗原与之竞争时，标记抗原和抗体的结合达最大值。 非特异结合管（NSB）：标记抗原除了要和特异性抗体结合以外，还要和一些杂质蛋白或容器的管壁等结合，对我们的分析结果产生影响。NSB管是用蒸馏水代替特异性抗体，在相同条件下反应后测得的放射性。;总放射性管（T）：反应后不分离就直接测得的放射性就是总放射性。表示标记抗原抗体复合物和游离的标记抗原的总放射性。 标准管（B1~Bn）：放有不同浓度的标准抗原，再加入相同量的标记抗原和特异抗体。一般在反应后分离出沉淀，测定沉淀的放射性作为B。 样品管（Bx）：用同剂量的样品代替标准管中的标准抗原，在相同条件下反应和分离，同样取沉淀测得其放射性，就可以在绘制的标准曲线上找到样品的浓度。;选用不同的反应变量作纵坐标，标准曲线的形状也不同。 常用的有B%，B/F，B/Bo，F/B，Bo/B等。;标准曲线左：横座标为等份刻度；右：横座标为对数刻度 ;二、RIA基本试剂;抗原的作用：;1.标准抗原;标准抗原的要求：;标准抗原的定量要准确： 整个RIA分析系统的定量基础就是标准抗原的量，因此标准抗原的定量一定要准确，即与国家规定的标准品相比有良好的可比性。 只有保证标准抗原的准确定量，才能保证RIA分析系统的准确度和精确度。;标准抗原必须高纯度： 标准抗原应该含有尽可能少的化学杂质，以避免杂质对反应和计量的影响。 标准抗原的稳定性要好： 要保证在试剂盒的运输、储存和在实验过程中应该不发生降解，分离、破坏等。;2.标记抗原：;标记抗原的要求;标记抗原要有足够高的放射化学纯度，一般要大于95%。 放射化学纯度不高，可能使一些放射性的杂质对RIA的免疫反应和动力学参数产生影响。 由于存在放射性核素的衰变，因此在长期储存后的标记抗原一般要经过重新提纯后才能再次使用。;标记抗原的稳定性要好： 和标准抗原相比，标记抗原由于有了放射性核素射线的影响，更容易发生分解。 在标记抗原的储存上，应遵循标记化合物的保存原则即低温、降低比放射性、清除自由基等。;(二)特异性抗体;多克隆抗体一般是用抗原免疫年轻、健康的纯种小动