论文：改性香菇纤维素衍生物抑制黄曲霉菌产毒研究.docVIP

论文题目：改性香菇纤维素衍生物抑制黄曲霉菌产毒研究 改性香菇纤维素衍生物抑制黄曲霉菌产毒研究 摘 要：黄曲霉毒素是一类主要由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物，具有致癌、致畸、致细胞突变的作用，被联合国粮农组织和世界卫生组织认定为Ⅰ类致癌物质，严重影响人类健康。曲霉毒素污染控制仍是世界性科学难题。研究发现了香菇纤维素的一种衍生物（Glycoprotein, GPX）有着超强的抑制黄曲霉菌产毒活性。进一步对做了修饰，研究修饰后的。： ； ； ；Three structural modifications of lentinan renew its inhibitory effects on AF production in Aspergillus flavus Abstract：Aflatoxins（AFTs）are highly toxic and careinogenic secondary metabolites produced mainly by spergillus flavus and Aspergillus parasiticus, recognized as the Class Ⅰ carcinogens by Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) and Word Health Organization (WHO) . We found a derivative (glycoprotein，GPX) fm Lentinus edodes cellulose, which inhibited the aflatoxin B1 (AFB1) production by A. flavus effectively。 Through structural analysis, GPX were finally identified as soluble β-1,4-glucan –peptide complexes. Keywords: 目录 引言 5 1.材料 6 1.1 供试材料 6 1.2 试剂与仪器 6 1.2.1主要试剂 6 1.2.2主要仪器 7 2.方法 7 2.1黄曲菌的培养 7 2.2黄曲霉菌丝产量测定 72.3黄曲霉毒素分析 7 2.4香菇多糖的结构修饰 8 2.4.1羧甲基化改性 8 2.4.2硫酸化修饰 8 2.4.3磷酸化改性 8 2.5傅里叶变换红外光谱 8 2.6半定量RT-PCR分析 9 2.7数据分析 9 3．结果 10 3.1结构修饰 10 3.2对菌丝体的生长和黄曲霉毒素生产的影响 10 3.3基因转录分析 13 4.讨论 14 参考文献 15 致谢 17 引言 黄曲霉属于黄曲霉属真菌，通过孢子进行传播，能够侵染粮食、油作物的种子、各种食品和饲料等，侵染后，快速生长并产生具有有致癌致畸的黄曲霉毒素，对农作物的产量以及人、兽和禽类的健康构成很大威胁[1]。 控制黄曲霉毒素污染一直是个世界性难题。目前国内有关黄曲霉的研究主要集中在对黄曲霉毒素检测方法的改进，而对如何防治黄曲霉及控制其毒素污染的报道很少。国外研究主要集中在对黄曲霉的生物防治，包括利用其他微生物的竞争和拮抗作用来抑制黄曲霉的生长，或从植物或微生物中提取抗菌物质抑制黄曲霉生长和产毒。2005年，Reverberi等[2]报道香菇（Lentinus edodes）中的多糖提取物能够抑制寄生曲霉（A. parasiticus）产生黄曲霉毒素。研究表明很可能是多糖提取物中的β-葡聚糖激活了与氧化胁迫反应相关的转录因子hsf-2，并且延迟了黄曲霉毒素产生相关基因afIR和norA的转录。2006年，Zjalic等发现白腐菌（Trametes versicolor）产生的β-葡聚糖也能够抑制黄曲霉毒素的合成，再次展现了β-葡聚糖在黄曲霉毒素控制中的应用前景[3]。 实验室前期研究发现了香菇纤维素的一种葡聚糖衍生物GPX有着超强的抑制黄曲霉菌产毒活性。通过结构分析，最终确定GPX为水溶性β-1,4-葡聚糖肽复合物。为了有针对性的筛选或合成修饰出控制黄曲霉毒素污染的β-葡聚糖制剂，就必需要了解β-葡聚糖抑制黄曲霉毒素所依赖的分子特性。本论文进一步对GPX做了羧甲基化、硫酸化、磷酸化等改性修饰，研究了不同修饰后的GPX对黄曲霉菌产毒的影响，以探讨其抑制黄曲霉菌产毒的作用机制，为控制黄曲霉毒素污染的多糖制剂的研发提供理论基础，有助于早日实现我们具有自主知识产权的绿色多糖型黄曲霉毒素控制制剂的工业化生产。 1.材料 1.1 供试材料 黄曲霉菌CGMCC3.2890购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，PDA培养基4℃保存。黄曲霉毒素B1（af