wildtypegene没有发生突变的基因.ppt

2.线粒体的密码系统和蛋白质合成  在蛋白质合成时，mRNA上的密码和tRNA上的反密码是对应的。已知20种氨基酸有61种对应的密码子，按照摆动学说，最少需要32种tRNA才能完全识别mRNA中的61个密码子。但在线粒体中，tRNA的种类显然小于此数(如人的mtRNA只有22种)，而且已有实验证明，无细胞质tRNA 进入线粒体参入其蛋白质的合成过程。这些事实表明，在线粒体基因表达过程中的密码系统与通用密码系统不一样。密码的非通用性首先是在线粒体中发现的，但是现在已知在一些细胞基因组中已被应用。例如有些原核生物用GUG为起始密码而不是通用的AUG。  虽然线粒体基因组可编码一些为线粒体呼吸链所需要的蛋白质，但是大多数线粒体蛋白质不是线粒体基因编码的，而是由细胞核编码的大量的蛋白质通过至今尚不完全了解的途径进入线粒体的，已知人的线粒体中有300-400种已知的蛋白质，只有13种是其线粒体基因编码的 ，不到线粒体总蛋白质含量的10%。 线粒体的核糖体在大小上类似于原核生物的核糖体，但是前者核糖体的一个重要特征是对影响细菌中蛋白质合成的抗生素敏感，所以线粒体中蛋白质的合成受氯霉素的抑制，这一现象表明，线粒体与细菌之间的近缘关系，也是支持真核的细胞器(线粒体、叶绿体)是由内共生细菌演化出来的假设的重要证据之一。 四、丝状真菌的准性生殖 ? 丝状真菌遗传学研究主要是借助有性过程和准性生殖过程，并通过遗传分析进行的，而且是以粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)和构巢曲霉(Aspergillus nidulans)为模式菌。虽然近年来发展了DNA转化系统，但转化频率很低，一般每微克转化DNA产生100个以下的转化子。而准性生殖是丝状真菌，特别是不产生有性孢子的丝状真菌特有的遗传现象，下面作简要介绍。 所谓准性生殖(parasexual reproduction)是指不经过减数分裂就能导致基因重组的生殖过程。在该过程中染色体的交换和染色体的减少不像有性生殖那样有规律，而且也是不协调的 。 准性生殖过程包括异核体的形成、二倍体的形成以及体细胞交换和单元化。所谓异核体(heterocaryon)是指同时具有二种或二种以上不同基因型核的细胞，这种现象又又称为异核现象。真菌的菌丝相互接触时，通过菌丝间的连接，细胞核可混合在一起而形成异核体，并可以百万分之一的机率发生核融合而形成二倍体(或杂合二倍体)。二倍体细胞在有丝分裂过程中也会偶尔发生同源染色体之间的交换(即体细胞重组)，导致部分隐性基因的纯合化，而获得新的遗传性状。所谓单元化过程是指在一系列有丝分裂过程中一再发生的个别染色体减半，直至最后形成单倍体的过程，不像减数分裂那样染色体的减半一次完成。 第七节 微生物育种 ? 在生物进化过程中，微生物形成了愈来愈完善的代谢调节机制，使细胞内复杂的生物化学反应能高度有序地进行和对外界环境条件的改变迅速作出反应。因此，处于平衡生长，进行正常代谢的微生物不会有代谢产物的积累。而微生物育种的目的就是要人为地使某种代谢产物过量积累，把生物合成的代谢途径朝人们所希望的方向加以引导，或者促使细胞内发生基因的重新组合优化遗传性状，实现人为控制微生物，获得我们所需要的高产、优质和低耗的菌种。为了实现这一目的必须设法解除或突破微生物的代谢调节控制，进行优良性状的组合，或者利用基因工程的方法人为改造或构建我们所需要的菌株(见第十章)，本节主要讨论解除或突破微生物的代谢调节和体内基因重组的途径和策略，得到所需的优良菌株。 1.常用诱变剂的使用方法  以紫外线和5-溴尿密啶分别代表物理和化学诱变剂进行简要介绍。  (1)紫外线 　　这是一种使用方便、诱变效果很好的常用诱变剂。在诱变处理前，先开紫外灯预热20分钟，使光波稳定。然后，将3～5ml细胞悬浮液置6cm培养皿中，置于诱变箱内的电磁搅拌器上，照射3～5分钟进行表面杀菌。打开培养皿盖，开启电磁搅拌器，边照射边搅拌。处理一定时间后，在红光灯下，吸取一定量菌液经稀释后，取0.2ml涂平板，或经暗培养一段时间后再涂平板。 (2)5-溴尿嘧啶(5BU) 　　称取5-BU，加入无菌生理盐水微热溶解，使浓度为2mg/ml。将细胞培养至对数期并重悬浮于缓冲液或生理盐水中过夜，使其尽量消耗自身营养物质。将5BU加入培养基内，使其终浓度一般为10～20μg/Ml，混匀后倒平板，涂布菌液，使其在生长过程中诱变，然后挑单菌落进行测定。  处理孢子悬浮液时，可采用较高浓度的5BU(100～1000μg/ml)与孢子悬浮液混合后振荡培养 ，经一定时间后适当稀涂平板。  其它化学诱变剂的处理方式大体相同，但在浓度、时间、缓冲液等方面随不同的诱变剂有所不同，可参阅有关的实验手册和资料。  为了提高诱变效率，常用物理、化学二