PCR质量典型实例.ppt

临床基因扩增实验室质量保证 西安友谊医学检验所 王洋 核酸实验室工作要求及流程 1、设施与环境： 由于基因扩增检验对靶核酸有一个指数扩增过程,因而有大量的扩 增产物的出现，这种产物极易对以后新的扩增反应产生“污染”，为防止这种污染的发生，就需要对实验室进行严格分区。 2、人员： 必须经过培训并取得上岗证。 3、设备、标本、耗材、记录的管理 四个方面阐述 一、测定前的标本采集处理 二、测定中的核酸提取 三、扩增和产物分析 四、测定后的结果报告 测定前的标本采集 标本的采集 临床PCR实验室对各种临床标本的收集都建立了标准操体程序（SOP）。标本的采集、运送和保存对检验结果往往有决定性的影响，因此，为保证得到高质量的检验结果，必须有一个规范的临床标本采集、运送和保存的程序。 测定前的标本采集 常用于基因扩增检测的临床标本包括： 1、EDTA或枸椽酸钠抗凝全血或骨髓 2、血清或血浆 3、尿液、乳汁、组织 4、咽拭子、生殖道拭子及分泌物等。 测定前的标本采集 二、影响标本采集的因素 1、标本采集的时间 2、标本采集部位 3、标本采集的类型和采集量 4、采样质量的评价 5、采样及运输容器 6、标本采集中的防污染 测定前的标本采集 采集时间 标本采集过早或过晚都可能会给出假阴性结果。当病原体感染机体后，特定的临床标本中，病原体含量能达到PCR检出水平的点，并不能覆盖整个感染过程，可能只是在感染或疾病发生发展过程中的某一个时间段。 如：呼吸道冠状病毒，感染发病后3-4d，即可出现于上或下呼吸道标本中，在10-13天，在尿液和粪便中出现的浓度最高，而在血液中，则不但存在时间短，而且浓度低。 又如：HBV、HCV和HIV感染等，机体感染后，在特定抗原和抗体出现以前，血循环中即可有较高的病原体存在，而当抗体出现后，病原体的浓度在不同的患者不同的感染阶段有可能是不一样的，有的可能会低于特定PCR方法的测定下限。 测定前的标本采集 采样质量的评价 ⑴、血清（浆）标本可观察标本是否溶血、脂血及其程度；（血红素及其代谢产物、脂类等对PCR有抑制作用） ⑵、分泌物标本，则可从细胞组成，所需类型细胞的数量