dp419rnasimple总rna提取试剂盒操作-天根生化科技.pdfVIP

（DP419）RNAsimple 总RNA提取试剂盒操作指南 ——动物组织 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. 动物组织 研磨器或液氮，研钵 2. 无水乙醇 氯仿 3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml）；1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free） 4. 涡旋振荡器，台式低温离心机 实验准备-试剂盒准备 第一次使用前应在去蛋白液RD、漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参 见瓶上标签。并在加入无水乙醇后在瓶身做好标记。 Step 1 将组织中加入少于150 μl 的裂解液RZ 每50–100 mg组织补加裂解液 用研磨器匀浆成无明显团块，或在研 RZ至1 ml 并迅速混匀 钵中用液氮充分研磨。 注意：样品体积不应超过裂解液 (1ml)RZ体积的十分之一。 Step 2 将匀浆样品在15–30放置5 min ， 样品颜色会变的稍微灰暗 使得核酸蛋白复合物完全分离。 Step 3 （可选步骤） 4 12,000 rpm (~13,400×g) 离心5 min ， 取上清，转入一个新的无RNase的离心管中。 注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉部分等，可加此步骤离心去除。 离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液中。 Step 4 加入200 μl氯仿，盖好管盖 剧烈振荡15 sec，室温放置3 min Step 5 水相 中间层 有机相 4 12,000 rpm (~13,400×g) 离心10 min， 把水相转移到新管中，进行下一步操作。 水相的体积约为所用裂解液RZ试剂的50% Step 6 缓慢加入0.5倍体积无水乙醇， 将溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，412,000 rpm 混匀（此时可能会出现沉淀）。 (~13,400 ×g)离心30 sec ，弃掉收集管中的废液。 若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱CR3，请分两次转入吸附柱CR3中， Step 7 向吸附柱CR3中加入500 μl去蛋白液RD （使用前请先检查是否已加入乙醇）， 4 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ，弃废液，将CR3放入收集管中。 Step 8 向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW （请先检查是否已加入乙醇）， 室温静置2 min ，4 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ，弃废液。 Step 9 重复操作步骤8 Step 10