第二章 荧光光谱与荧光信号采集处置.pptVIP

红色荧光显示微丝 黄色显示微管 兰色显示细胞核 3.考察荧光探针与所用共聚焦系统的匹配情况 主要指：二者的激发波长要匹配；仪器的性能能否达到实验要求，如扫描速度能否检测到荧光信号的快速变化等。 广谱性的荧光染料（探针） 苯胺蓝、焦宁Y（pyronin Y） 罗丹明B（rhodamine B） 荧光素（fluorescein） 曙红Y（eosin Y） 吖啶橙（acridine orange） 专一性的荧光染料（探针） 核酸检测探针：DAPI、PI、YOYO、TOTO 肽和蛋白质检测探针：Fluorescamine，OPA， BCA method 酶检测探针：EnzChekTM 5’—Nucleotidaes Assay kit 细胞骨架探针：微管探针、微丝探针 常用荧光探针举例 1.标记细胞器的荧光探针 1)线粒体 Mitochondria Rodamin 123 505/534 ，可染活细胞，阳离子, 可检 测线粒体膜电位, 且在多数细胞中停留时间 短（慢反应线粒体膜电位探针） JC1 线粒体膜电位低时为单体 490/527 发绿光 线粒体膜电位高时为多聚体 490/590 发红光 可标记活细胞线粒体，且为检测线粒体膜电 位最佳探针 Mitotracker Green FM 490/516, 染活细胞或固定细胞 , 稳定不漏出 Mitotracker Orange CMTMRos 551/576, (氧化型) Mitotracker Orange 还原型, 只能染活细胞 2)溶酶体 Lysosome 中性红 541/640: 微偏碱性, 可标记溶酶体等酸性器 官为非特异性 3)内质网 Endoplasmic Reticulum DiOC6 484/500: 非特异性, 较高浓度标记内质网, 较低浓度标记线粒体 4)高尔基体 Golgi apparatus NBD C6-ceramie 466/536, 可染活或死细胞 5)细胞核 PI propidiumiodide 536/617 DNA/RNA 死细胞 EB ethidium bromide 518/617 DNA/RNA 死细胞 Hochest 33342 352/461 DNA A-T 活细胞 Hochest 33258 352/461 DNA A-T 活细胞 DAPI 358/461 DNA A-T 半通透细胞 AO 500/526 DNA 活细胞 500/650 RNA TOTO-1 514/533 DNA 死细胞 SYTO11~16 20~24 488/ 520 活细胞 SYTO11~16 20~24 521/ 556 活细胞 SYTO 17 621/634 活细胞 2. pH荧光探针 ⑴SNAFL-calcein-AM：胞浆pH荧光探针，吸收波长为 506nm，发射波长为530nm、605nm； 适用于单激发双发射测量。 ⑵BCECF-AM：胞浆pH荧光探针，吸收波长4