2016年级基因工程的基本操作程序34.ppt

SUITANG LIANXI 随堂练习 JICHU ZHISHI 基础知识 首 页 ZHONGDIAN NANDIAN 重点难点 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 (三)将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化—— 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 —— 感受态细胞法（Ca+离子处理法） (三)将目的基因导入受体细胞 1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌 转化法 特点: 能感染双子叶植物和祼子植物,对大多数单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到染色体DNA上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 基因表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞 染色体DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。单子叶植物常用，成本较高。 （3）花粉管通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。转基因抗虫棉用此法，简便经济 2、将目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 提纯含有目的基因的表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理（感受态细胞法） 常用菌：大肠杆菌 原核生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 探究问题1：有关基因探针（基因探针） 1、什么是基因探针？ 2、制作有哪三个要求？ 3、检测原理是什么？ 4、有什么应用？ 5、一种基因探针是否既可以用来目的基因导入检测，又用于转录检测？ ①标记——同位素或荧光；②单链；③序列与待测基因互补（相同） 碱基互补配对原则 目的基因的导入检测；疾病诊断；饮用水中病毒的检测等等。 可以 基因探针, 是一段用放射性同位素或荧光标记的、且顺序已知的、与目的基因互补（相同）的核酸序列 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 DNA分子杂交 抗原-抗体杂交 知识延伸——DNA分子杂交技术 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。 如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。 cDNA合成过程 第一步：反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的 DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。 第二步：核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降 解，使之变成单链的DNA。 第三步：以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合 成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。 * * 1.下表关于基因工程中有关基因操作 的名词及对应的内容，正确的组合是 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 3.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B．有利于对目的基因是否导入进行检测 C．增加质粒分子的分子量 D．便于与外源基因连接 4. 有关基因工程的叙述正确的是 A．限制酶只在获得目的基因时才用 B．重组质粒的形成是在细胞内完成的 C．质