生物物理学复习课程.pptVIP

生物物理学 （Biophysics); 生物物理学是由物理学与生物学相互结合而形成的一门交叉学科。 它应用物理学的基本理论、方法与技术研究生命物质的物理性质，生命活动的物理与物理化学规律，以及物理因素对机体的作用。;生物物理学发展简史;生物物理学的内容;荧光分光光度;一、荧光的发现 二、荧光与荧光光谱 三、荧光光谱仪及主要谱参量 四、荧光生色团的结构特点 五、影响荧光测量的因素 六、荧光技术在生物学、医学研究中的应用;一 荧光的发现;（一） 荧光的产生;（一） 荧光的产生;（二）荧光光谱与吸收光谱;荧光分光光度术： 又称荧光光谱术，属于光谱技术中的一种发射光谱术。其原理是电磁波和物质作用后，物质首先吸收电磁波的能量，然后再重新发射电磁波。激发波段在100-800nm之间，相当于紫外与可见光波段。;（一）荧光光谱仪 （二）荧光分光光度术中的参量 ;（一）荧光光谱仪 ;（二）荧光分光光度术中的参量 ;瑞利峰 拉曼峰 ;A 荧光强度的定义：在一定激发波长(λex)作用下，发射的 荧光强弱。 F=Ia? Ia=I0-I，I=I010-εcL F = ? I0(1-10-εcL ) {当C很低时F= ? I0εcL ， {当C较大时F=I0? B ?=发射光子数/吸收光子数 ;荧光强度与浓度的关系;荧光偏振( fluorescence polarization) ;I//-I?;(1) 荧光偏振度的物理意义： A ：I//=I? ，P=0，自然光，荧光分子运动很快，取 向随机。（稀溶液） B：I//或I?为0 ，P=±1 偏振光，荧光分子运动很慢，取向有序。 C： I//?I? ? 0 ，0P1，生物大分子的荧光属于这种情况。;(2) 仪器校正因子G;(3) 环境因素及分子运动对荧光偏振度的影响 ;（二）荧光分光光度术中的参量;四 荧光生色团的结构特点;（2）分子的几何排布： 具有刚性平面结构 ;（4）取代基的位置： 邻位、对位—荧光增强，间位—荧光减弱（-CN基例 外） (5)环境、溶剂、温度及pH等均会影响分子结构，从而影响荧光;2 蛋白质和核酸中的荧光生色团;生色团; ;六 荧光分光光度术的应用;检测物质;2.蛋白质的内源荧光 ;3.蛋白质的荧光标记;4 核酸的荧光标记;5 酶反应动力学的研究;用杀鼠灵滴定HSA ;7 大分子内基团间或分子间距离的测定;荧光共振能量转移的三个条件：;Forster 公式;(1)膜流动性 DPH ：P值小，流动性高 2-AS，6-AS，9-AS，12-AS高 (2) 膜渗漏性 羧基荧光素( selfquenching) (3) 膜电位的测量 花菁（cyanine) : 超极化时，荧光强度F下降。 缬氨霉素：K+载体 Nernst公式：E(mV)=59log(KO+/KI+) KO+：细胞外浓度， KI+：细胞内浓度;(4)膜融合机理的研究;?1/2;D：扩散系数，ω：光斑半径， ?1/2：漂白后的荧光值恢复到稳定值的一半 所需时间， rD：与光斑形状有关的一个常数。;9 荧光技术与其它技术的结合;Fluo-3/Ca2+，AM, ?ex=506nm, ?em=526nm;; 七 思考题 1 荧光产生的机理是什么？ 2 荧光技术研究的生物学样品的主要参数有哪些？量子产率与荧光强度的区别及关系是什么？ 荧光偏振的意义是什么？ 3 举例说明荧光技术的应用？ ;4.如果婴幼儿体内缺乏使苯丙氨酸转变为酪氨酸的酶时，则苯丙氨酸的含量异常增大而患“苯丙酮尿症”且易引起智力低下，所以，对婴幼儿的该项体查极为重要，但是，由于血液蛋白质中其它芳香氨基酸的影响而难以测出苯丙氨酸的含量，请用本课程所学内容提出一个检测方案。;参考资料